Bioquímica

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Examinando Bioquímica por Autor "Castello, Alejandro"

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    Puesta a punto de un método de RT-PCR en tiempo real para la detección de Virus Sincicial Respiratorio (VSR) y comparación con métodos de rutina en el laboratorio bioquímico
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) Herasimiuk, Melisa Anabel
    La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños (Borchers, A. T., et al.,2013)y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido disminuye el uso innecesario de antibióticos y pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio bioquímico por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de multiplexado, es decir la detección de cuatro o cinco patógenos simultáneamente (dependiendo de la cantidad de canales del instrumento usado). Objetivos: Puesta a punto de una RT-qPCR capaz de detectar VSR sobre el material de referencia.Materiales y métodos: Se utilizó el kit QIAprep& Viral RNA UM, Qiagen diseñado para detección de SARS-Cov-2 y otros patógenos respiratorios que realizan la RT y la PCR subsiguiente en forma directa y en un solo tubo. La reacción y detección del virus se realizó con un equipo CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (BioRad Laboratories) utilizando el canal de FAM para el VSR, el de HEX para el control endógeno y el de Cy5 para el control interno (control exógeno). Los resultados se analizaron con el Software Maestro (CFX Maestro Software, BioRad Laboratories). Conclusiones:Fue posible poner a punto una técnica de detección por RT-qPCR para virus sincitial respiratorio humano que resultó comparable en cuanto a su capacidad de detección a las técnicas de rutina de inmunofluorescencia directa (IFD) y amplificación isotérmica LAMP (IDNOW RSV de Abbot). Sin embargo, para los laboratorios equipados y que puedan montar esta metodología, la RT-qPCR tiene grandes ventajas dado que puede detectar presencia de virus donde LAMP o IFD no pueden, es más versátil y económica, permite la opción de multiplexado, el procesamiento de muchas más muestras por hora y la posibilidad de modificación por el operador.
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    Puesta a punto de un método multiplex RT-qPCR en tiempo real para la detección de virus respiratorios de importancia sanitaria
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-04-16) Albarracin, Leila Evelyn
    La infección respiratoria aguda (IRA) producida por el Virus Respiratorio Sincicial (RVS) es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad-mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico temprano disminuye el uso innecesario de antibióticos, pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio por su velocidad, sensibilidad, posibilidad de testeo simultáneo de muchas muestras y demultiplexado. En el contexto del siguiente proyecto se va a intentar extender el rango de virus detectados combinando el desarrollo de Mancini con técnicas para la detección de otros dos patógenos respiratorios. En particular se trabajará en el estudio de la compatibilidad del desarrollo de Mancini con sus primer y probe con los correspondientes a las real time PCRs para rinovirus (HRV) de Marcone y colaboradores (Marcone et al., 2012) y la de Fry y colaboradores para virus sincicial respiratorio (Fry et al., 2010).