Puesta a punto de un método de RT-PCR en tiempo real para la detección de Virus Sincicial Respiratorio (VSR) y comparación con métodos de rutina en el laboratorio bioquímico
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Fecha
2023
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Editor
Universidad Nacional Arturo Jauretche
Resumen
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños (Borchers, A. T., et al.,2013)y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido disminuye el uso innecesario de antibióticos y pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio bioquímico por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de multiplexado, es decir la detección de cuatro o cinco patógenos simultáneamente (dependiendo de la cantidad de canales del instrumento usado). Objetivos: Puesta a punto de una RT-qPCR capaz de detectar VSR sobre el material de referencia.Materiales y métodos: Se utilizó el kit QIAprep& Viral RNA UM, Qiagen diseñado para detección de SARS-Cov-2 y otros patógenos respiratorios que realizan la RT y la PCR subsiguiente en forma directa y en un solo tubo. La reacción y detección del virus se realizó con un equipo CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (BioRad Laboratories) utilizando el canal de FAM para el VSR, el de HEX para el control endógeno y el de Cy5 para el control interno (control exógeno). Los resultados se analizaron con el Software Maestro (CFX Maestro Software, BioRad Laboratories). Conclusiones:Fue posible poner a punto una técnica de detección por RT-qPCR para virus sincitial respiratorio humano que resultó comparable en cuanto a su capacidad de detección a las técnicas de rutina de inmunofluorescencia directa (IFD) y amplificación isotérmica LAMP (IDNOW RSV de Abbot). Sin embargo, para los laboratorios equipados y que puedan montar esta metodología, la RT-qPCR tiene grandes ventajas dado que puede detectar presencia de virus donde LAMP o IFD no pueden, es más versátil y económica, permite la opción de multiplexado, el procesamiento de muchas más muestras por hora y la posibilidad de modificación por el operador.