Trabajos Finales (Bioquímica)

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Estudio del impacto de la expresión de la P5B-ATPasa 13A2 sobre la infección del virus Chikunguña en células SH-SY5Y
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-12-19) Suárez, Agustina Lujan
Las ATPasas de tipo P pertenecen a una superfamilia de proteínas que transportan cationes inorgánicos y otros sustratos a través de las membranas celulares. Utilizan la hidrólisis de ATP para realizar el transporte del sustrato y se caracterizan por la formación de un intermediario fosforilado durante su ciclo de reacción. Por similitud de secuencia se han dividido en cinco subfamilias denominadas tipo I-V o P1-P5. La subfamilia de P5-ATPasas se expresa únicamente en eucariotas y se divide en dos grupos denominados P5A y P5B; la ATP13A1 pertenece al grupo de las P5A, mientras que las ATP13A2-5 se agrupan dentro del grupo de las P5B. Las P5A-ATPasas se encuentran en el retículo endoplásmico y afectan la maduración y secreción de proteínas, mientras que las P5BATPasas se localizan en endosomas tardíos (conocidos también como cuerpos multivesiculares, MVBs) y lisosomas y están implicadas en el correcto funcionamiento del sistema endolisosomal. Se ha demostrado que las P5B-ATPasas, como la P5B-ATPasa 13A2 (ATP13A2), exportan poliaminas como la espermidina desde el interior de los MVBs y lisosomas hacia el citosol. En este sentido, resultados obtenidos en nuestro laboratorio mostraron que la ATP13A2 provoca un aumento en la capacidad de almacenamiento de la poliamina natural espermidina y altera la homeostasis lipídica de manera consistente con la exocitosis del sistema endolisosomal. Inicialmente, la disfunción de las P5B-ATPasas ha sido vinculada a varias neuropatologías. Mutaciones que causan la pérdida de función del gen humano ATP13A2 subyace una forma de aparición temprana de Parkinson denominada Síndrome de Kufor Rakeb (KRS), así como un tipo de Lipofusinosis Ceroidea Neuronal (NCL), Paraplegia Espástica Hereditaria y Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA). Sin embargo, recientemente se encontró que la expresión de la ATP13A2 está aumentada en pacientes con cáncer colorrectal y cervical, mientras que la ATP13A3 está incrementada en cáncer de páncreas. Estos hallazgos amplían el abanico de enfermedades en las que esta subfamilia de P5B-ATPasas está involucrada y demuestra que tanto la ausencia como la sobreexpresión de estas proteínas afectan profundamente la homeostasis celular, lo cual sugiere que podrían afectar el desarrollo de otras patologías hasta ahora inexploradas. Una vasta evidencia indica que la regulación del metabolismo de lípidos ejercida por los virus tiene un rol importante en su ciclo de replicación e impacta en la infección. Además, muchos virus requieren poliaminas para uno o varios pasos de su ciclo de replicación como la polimerización del ADN y ARN, empaquetamiento de los ácidos nucleicos y síntesis proteica. Asimismo, muchos virus con envoltura dependen del tráfico endolisosomal de la célula huésped para ingresar a las células e iniciar su ciclo de infección. Con este propósito, el objetivo de este trabajo fue evaluar el impacto de la expresión de la ATP13A2 sobre la infección del virus Chikunguña (CHIKV) en células derivadas de un neuroblastoma humano denominadas SH-SY5Y. Con el propósito de obtener clones de células con el gen ATP13A2 inactivado mediante el sistema CRISPR-Cas9, inicialmente se generó un plásmido que codifica el ARN guía dirigido al gen ATP13A2, junto con la nucleasa Cas9, con el cual se transfectaron las células SH-SY5Y. Algunos clones mostraron una menor tasa de división celular respecto de las células SH-SY5Y salvajes, lo cual es esperable dado que las poliaminas estimulan la proliferación celular. A continuación, se seleccionó uno de los clones con menor tasa de división y se utilizó junto con un clon de células que sobreexpresan la ATP13A2 activa, así como una versión mutante inactiva de esta proteína, generados previamente en nuestro laboratorio. Con estas líneas celulares se evaluó la replicación viral del CHIKV mediante titulación por ensayo de unidades formadoras de placas (UFP). A partir de esta estimación se pudo observar que, si bien las diferencias no son significativas, la línea celular que no expresaría la ATP13A2, mostró un título viral menor que el de las células control o que sobreexpresan la ATPasa.
Frecuencia de endoparásitos en biofilms recolectados de recipientes de alimentos y bebederos de animales domésticos de las localidades de Berazategui, Quilmes y Almirante Brown
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-12-19) Miranda, Eliana Gabriela
La presencia de enfermedades parasitarias en animales se ha convertido en una preocupación creciente en el ámbito de la salud veterinaria y el bienestar animal. Según Tigrero (2015), estas enfermedades en perros y gatos pueden manifestarse de forma aguda o crónica, causando un deterioro significativo en su salud, con síntomas que incluyen diarrea, falta de apetito, anorexia, problemas en la absorción y conversión de nutrientes, así como obstrucción intestinal, lo que puede llegar a ser fatal para el animal. Por esta razón, es fundamental que los profesionales de la medicina veterinaria diseñen y realicen investigaciones para determinar la frecuencia de aparición de parásitos, siempre priorizando el bienestar animal, y así puedan proponer campañas o programas de control basados en los resultados obtenidos. En los últimos años, las mascotas han adquirido un papel relevante en la vida familiar, siendo consideradas miembros más del hogar. Este cambio de perspectiva ha llevado a una mayor atención a su salud y bienestar (Tello, 2004). La vida salvaje, como señala Panayotova-Pencheva (2013), representa un valioso recurso natural que enriquece nuestro entorno, y las enfermedades infecciosas y parasitarias que afectan a estas especies son relevantes por su impacto, tanto directo como indirecto, en las poblaciones animales, así como por su conexión epidemiológica con la salud pública. Diversos estudios han demostrado que los endoparásitos no solo representan riesgos para la salud de los animales, sino que también pueden afectar a los humanos y a otros animales en su entorno. Según la Organización Mundial de la Salud (OPS, 2023), las zoonosis son enfermedades infecciosas que se transmiten naturalmente desde animales vertebrados al ser humano. La interacción cercana entre humanos y animales, junto con el aumento de la actividad comercial y el movimiento de personas y animales ha facilitado una mayor diseminación de estas enfermedades. La Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE, 2020) advierte que la transmisión de parásitos a través de fuentes de agua contaminada puede contribuir significativamente a la propagación de enfermedades zoonóticas. Por esta razón, es esencial investigar cómo los bebederos, elementos clave en la vida diaria de los animales, pueden convertirse en focos de infecciones parasitarias. Sánchez (2022) destaca que la provisión de agua, alimentos y equipos es un componente principal de la bioseguridad en los criaderos de animales. Muchos patógenos pueden propagarse a través de diversas vías, especialmente el agua; por lo tanto, es crucial supervisar la calidad, higiene y seguridad de los alimentos, así como de los equipos utilizados, como comederos y bebederos. Estos elementos requieren un mantenimiento continuo dado que, la falta de higiene promueve la formación de biofilms en sus superficies. Los restos alimenticios, así como el agua estancada crean un ambiente propicio para la adhesión y la proliferación de microorganismos como bacterias, hongos, algas, virus y parásitos, muchos de los cuales, se multiplican a gran velocidad, en pocas horas, sino se limpian adecuadamente. En Argentina se realizaron operativos veterinarios de desparasitación animal, tanto interna como externa, para evitar enfermedades parasitarias, prevenir el estrés de los animales, cuidar la salud humana (previniendo la transmisión de zoonosis) y mejorar la calidad de vida animal. La falta de desparasitación en animales domésticos puede ser considerada maltrato animal si causa sufrimiento y es motivo de denuncias en la Ciudad de Buenos Aires. A pesar de estos esfuerzos, las enfermedades parasitarias causadas por la propagación de endoparásitos del entorno continúan en la actualidad siendo una problemática en la región de Buenos Aires. Por lo que, se propone llevar a cabo un análisis para detectar la presencia de endoparásitos en recipientes de agua y alimento de estos animales.
Evaluación de distintos antígenos como candidatos en el desarrollo de métodos de diagnóstico para la detección de anticuerpos de histoplasmina
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-12-19) Mendez, Santiago Fabian
La histoplasmosis (HP) es una micosis sistémica causada por el hongo dimorfo Histoplasma capsulatum. Este microorganismo presenta una fase saprofítica filamentosa que habita naturalmente en ambientes enriquecidos con guano de murciélagos, gallinas, palomas y otras aves. La infección primaria o primoinfección puede ser asintomática o manifestarse como un cuadro respiratorio agudo o subagudo. Sin embargo, en pacientes inmunocomprometidos, la enfermedad puede progresar a formas diseminadas graves, afectando el pulmón y otros órganos, lo que conlleva altas tasas de mortalidad si no se administra un tratamiento oportuno. El diagnóstico definitivo de histoplasmosis (HP), se logra mediante el diagnóstico directo realizado por observación micro y/o macroscópica de levaduras intracelulares, requiriéndose un observador experimentado. Y el Histoplasma por el aislamiento e identificación desde cultivos, lo que requiere entre 7 y 60 días y poseer una CSB (cabina de seguridad biológica) clase 2. Ante la dificultad del diagnóstico definitivo, la evidencia serológica de esta infección fúngica es importante. Se han utilizado una variedad de inmunoensayos para detectar anticuerpos específicos contra H. capsulatum. Según la forma clínica la técnica más aplicada para la detección de anticuerpos es la inmunodifusión con una sensibilidad del 70 al 100 % y una especificidad del 100 %. La prueba de fijación del complemento (FC), una metodología ampliamente utilizada en el pasado, es menos específica (60 a 90%). La detección de antígenos fúngicos mediante inmunoensayos es valiosa en personas inmunocomprometidas, donde tales ensayos logran valores predictivos positivos de 96 a 98%. Existe un test comercial de aglutinación con látex acoplado a histoplasmina, con valores de sensibilidad variables y algunas reacciones cruzadas con otras micosis. Este test comercial no está disponible en Argentina por lo que no fue evaluado en nuestra población. Por ello proponemos desarrollar un reactivo similar realizado con antígenos optimizados para evaluar su utilidad en el inmunodiagnóstico de HP. Los test para detección de anticuerpos utilizan la histoplasmina que se obtiene del sobrenadante de cultivo micelial y los componentes inmunodominantes son los antígenos glicoproteicos H y M. Los anticuerpos anti-M son los primeros en aparecer y persisten durante toda la enfermedad. En el presente trabajo, se estudian distintos antígenos de Histoplasma capsulatum como antígenos útiles para la detección de anticuerpos. Se evaluará la utilización de histoplasmina, galactomanano y la proteína M recombinantes como antígenos en diferentes técnicas, como aglutinación de partículas de látex y dot blot. Se evaluará la inmunoreactividad de distintos antígenos con antisuero de conejo, que están inmunizados con antígenos de Histoplasma capsulatum y de otras micosis (Coccidioides posadasii, Paracoccidioides sp, Aspergillus sp y Cryptococcus neoformans-gatti).
El rol del bioquímico en el área de Asuntos Regulatorios abordado desde una pasantía profesionalizante en la Industria
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-12-19) Krasovsky, Myrna Macarena
El presente trabajo describe las principales funciones desarrolladas durante la pasantía en el Área de Asuntos Regulatorios, enfocándose en la gestión documental, el cumplimiento normativo y la articulación con autoridades sanitarias. Se presenta un marco teórico que contextualiza la labor regulatoria y su importancia en la seguridad del consumidor y la calidad de los productos. Los objetivos del proyecto incluyen comprender, aplicar y analizar los procesos regulatorios vinculados al registro, control y comunicación de productos domisanitarios en Argentina y Chile. En este marco, se trabajó en la elaboración de dossiers regulatorios, integrando documentación técnica, administrativa y legal, y aplicando normativas específicas según cada país. Se desarrollaron tareas de revisión y actualización de Hojas de Datos de Seguridad (HDS/PSDS), asegurando su alineación con sistemas internacionales como SGA y normativas locales. Asimismo, se evaluaron artes y proyectos de rótulo, verificando el cumplimiento de disposiciones vigentes, la correcta comunicación de riesgos y la coherencia con documentos técnicos aprobados. El trabajo también incluye la participación en auditorías internas, la aplicación de metodologías de análisis de riesgos, la elaboración de acciones correctivas y preventivas (CAPA) orientadas a mantener la conformidad regulatoria. Se analizó la función de la farmacovigilancia y su relación con la gestión de eventos adversos, así como la importancia de las buenas prácticas regulatorias y la evidencia científica en la toma de decisiones. Finalmente, el proyecto muestra cómo la formación bioquímica aporta una visión técnica esencial para la evaluación de seguridad, la interpretación normativa y la gestión responsable de productos regulados, contribuyendo de manera significativa a la protección de la salud pública.
Efecto del inhibidor de la actividad de la enzima ACSL4 sobre la progresión tumoral y la importancia de ACSL4 como blanco terapéutico en modelos celulares de cáncer colorrectal
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-11-27) Gutiérrez, Ludmila
El siguiente trabajo analiza el efecto de la actividad de la enzima ACSL4 (Acil CoA sintetasa 4) sobre la progresión tumoral y su importancia. Se realizaron determinaciones de niveles de proteínas y activación de las vías de señalización (fosforilación) por western blot y ensayos de proliferación celular (MTT) en modelos celulares de cáncer colorrectal derivados de adenocarcinoma (DLD-1, SW480, Caco-2) y metástasis pulmonar (T84). Evaluando los resultados del Western blot se seleccionaron las líneas celulares de estudio para el análisis del comportamiento del inhibidor de ACSL4, PRGL493 en DLD-1 y SW480 que expresan ACSL4, COX-2 y 5-LOX de manera diferencial, estas enzimas metabolizan el ácido araquidónico (AA), que es un ácido graso poliinsaturado, y juegan un papel directo en la progresión tumoral y su actividad se asocia a con una menor supervivencia en pacientes con cáncer colorrectal. Además, se evaluaron las vías de señalización WNT y mTOR, estas interactúan indirectamente con el metabolismo del ácido araquidónico (AA), principalmente a través de la regulación de procesos celulares como la inflamación, la proliferación y la supervivencia celular. La vía WNT/β-catenina, junto con la señalización de COX-2/prostaglandina, interactúa en diversos cánceres, promoviendo el crecimiento tumoral y la angiogénesis, y a su vez afectan la acumulación nuclear de β-catenina. La vía mTOR, a través de la cascada PI3K/Akt, también puede modular la expresión de componentes del metabolismo del AA, con su metabolismo de lípidos puede ser un precursor del AA, que se libera de los fosfolípidos de membrana y luego se metaboliza por enzimas como la ciclooxigenasa (COX) y la lipoxigenasa (LOX) para producir eicosanoides, promoviendo el crecimiento tumoral. Dado el rol fundamental de estos blancos moleculares en la proliferación tumoral, se espera que su inhibición reduzca la capacidad proliferativa de las células en estas líneas. Los experimentos realizados en este estudio demostraron que la combinación del inhibidor de la enzima ACSL4, PRGL493, con distintos fármacos que bloquean enzimas del metabolismo del AA y de vías de señalización celular —como mTOR y β-catenina/WNT— evidencia el papel de ACSL4 en la posible regulación de diversas rutas implicadas en la progresión tumoral. Esta combinación podría representar una estrategia efectiva para inhibir la proliferación celular en líneas de CCR.
Estabilidad térmica de Membranas Modelo - Efectos de la Oxidación Lipídica
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-08-08) Fraga, Carlos Sebastian
El estudio de la estabilidad de las membranas lipídicas es fundamental para comprender los efectos del estrés oxidativo en células biológicas. La peroxidación lipídica altera las funciones fisiológicas de las membranas celulares y desempeña un papel clave en el daño de estas. Se cree que la peroxidación está implicada en el envejecimiento celular y en diversas enfermedades, como el Parkinson, el Alzheimer, así como en la esquizofrenia, la aterosclerosis, las enfermedades inflamatorias y la lesión por isquemia-reperfusión cardíaca (Wong-ekkabut, Xu, Triampo, Tang, Peter Tieleman & Monticelli, 2007). En este trabajo, se analiza el comportamiento de membranas monocomponentes compuestas por 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC), considerado uno de los principales constituyentes fosfolipídicos de las membranas celularey cómo la oxidación lipídica modifica sus propiedades estructurales y térmicas. Para ello, se realizaron simulaciones de Dinámica Molecular, estudiando el comportamiento estructural de bicapas lipídicas a diferentes temperaturas. Cabe destacar que, además de su relevancia biológica, el POPC es uno de los lípidos más utilizados como modelo en estudios computacionales y experimentales de membranas, debido a su capacidad para formar bicapas estables en fase líquida desordenada bajo condiciones fisiológicas. Esta propiedad lo convierte en un sistema de referencia ideal para explorar los efectos de la oxidación sobre la organización y estabilidad de membranas lipídicas (Raghunathan & Katsaras, 1996). A esto se suma que, según estudios experimentales, el POPC presenta una respuesta reversible y bien caracterizada frente a cambios de presión y temperatura, con un comportamiento estructural altamente reproducible en fase fluida.(Rappolt, Vidal, Kriechbaum, Steinhart, Amenitsch, Bernstorff & Laggner, 2003). Estas propiedades lo convierten en un sistema de referencia confiable para estudiar, con resolución molecular, los efectos físicos y químicos sobre la organización y estabilidad de las membranas lipídicas Se analizaron dos sistemas modelo con el fin de evaluar el impacto de la oxidación lipídica: Una membrana formada exclusivamente por POPC puro. Una membrana de POPC oxidado, que simula condiciones de estrés oxidativo en la célula. El objetivo principal fue evaluar si la oxidación lipídica altera la estabilidad térmica de la membrana, promoviendo perturbaciones estructurales asociadas a una transición de fase del tipo gel (ordenada) a líquida (desordenada). Además, se evaluó la estabilidad térmica de los sistemas mediante un protocolo de annealing que incluyó ciclos de heating (calentamiento) y cooling (enfriamiento). Los resultados obtenidos fueron contrastados con datos previos de la literatura para validar los modelos y discutir las implicancias de la oxidación en la dinámica de membranas biológicas. “Para aplicar con éxito las tecnologías de biomembranas a problemas reales, es necesario profundizar en la comprensión de los mecanismos que regulan la movilidad relativa (fluidez) de las moléculas lipídicas individuales en la bicapa y aclarar cómo esta movilidad se ve influenciada por cambios en las condiciones ambientales” (Wong-ekkabut, Xu, Triampo, Tang, Peter Tieleman & Monticelli, 2007).
Puesta a punto y evaluación comparativa de diferentes coloraciones para el estudio de la morfología sanguínea en pacientes VIH positivos
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-12-19) Famularo, Cecilia Lourdes
El Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), descubierto en la década de 1980, continúa siendo un problema de salud pública a nivel mundial y también en Argentina. Más allá de la inmunodepresión característica de la infección, el VIH se asocia con una amplia gama de alteraciones hematológicas, entre las cuales la anemia representa una de las complicaciones más frecuentes y clínicamente relevantes, pero también se ve afectada la serie blanca y las plaquetas. La presencia de anemia en pacientes VIH positivos no solo impacta en la calidad de vida y en la evolución clínica, sino que también constituye un marcador pronóstico en la progresión de la enfermedad. La caracterización hematológica de estos pacientes requiere técnicas confiables que permitan una adecuada evaluación morfológica de las células sanguíneas. En este sentido, las coloraciones utilizadas en los extendidos de sangre periférica resultan herramientas fundamentales en el laboratorio de análisis clínicos. Entre ellas, la coloración de May Grünwald–Giemsa (MGG) es considerado el estándar para la observación de la morfología eritrocitaria y leucocitaria, mientras que la coloración con Giemsa representa una alternativa más sencilla y económica, que podría resultar útil en determinados contextos. El presente trabajo se llevó a cabo con el objetivo de estudiar qué tinción, del tipo Romanowsky, Giemsa ó May-Grünwald - Giemsa permitiría una mejor visualización, caracterización y valor diagnóstico de las alteraciones hematológicas en extendidos de sangre periférica de pacientes VIH positivos. Para esto se realizó, en cada extendido de sangre, las coloraciones antes mencionadas, la fórmula leucocitaria, recuento de plaquetas y observación de la morfología eritrocitaria que posteriormente fueron comparados con los resultados obtenidos de forma automatizada en el autoanalizador Mindray BC-20.
Estudio epidemiológico retrospectivo sobre dengue en la región sanitaria VI y su proceso de diagnóstico serológico en el laboratorio de referencia
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Zalazar, Adrián
El país experimentó uno de los brotes más significativos de dengue en las últimas dos décadas durante el verano del año 2024. Esta situación generó una alerta tanto en los sistemas sanitarios regionales como en la población, debido al incremento de casos positivos y de muertes asociadas a la infección por el virus del dengue, el cual forma parte de la familia de las arbovirosis, un grupo de virus transmitidos por artrópodos. En particular, el dengue es transmitido por el mosquito hembra Aedes aegypti previamente infectado. Este virus se caracteriza por la existencia de cuatro variantes de serotipos: DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4, que están estrechamente relacionadas entre sí. A pesar de su parentesco evolutivo, cada serotipo induce una respuesta inmunitaria distinta frente a antígenos específicos, lo que constituye una amenaza significativa para la salud pública a nivel global. La patología asociada con este virus es conocida como fiebre por dengue, y sus manifestaciones graves incluyen la hemorragia por dengue y el shock por dengue. Las infecciones por dengue se presentan predominantemente en regiones tropicales y subtropicales, que constituyen ambientes favorables para la proliferación del mosquito vector del virus (1). En los seres humanos, el dengue se manifiesta a través de un espectro clínico que abarca desde un síndrome febril agudo de carácter inespecífico hasta cuadros de enfermedad hemorrágica severa, los cuales pueden resultar en fatalidad. El período de incubación, es decir, el intervalo transcurrido desde la infección hasta la presentación de los síntomas generalmente oscila entre 4 y 10 días. El presente estudio tiene como objetivo analizar la epidemiología del dengue en la región, evaluar su impacto y examinar los métodos de diagnóstico serológico empleados en el laboratorio de referencia. Además, se busca comprender la relación y la importancia de proporcionar información pertinente en el contexto de la Red de Asistencia de Salud Pública, que interactúa con los diversos centros de salud, hospitales y Unidades de Pronta Atención (UPA) de los distintos municipios que integran la Región Sanitaria VI.
Fermentación de betaglucanos por la microbiota intestinal : Modificación de poblaciones bacterianas, producción de ácidos grasos de cadena corta y actividad inmunomodulatoria in vitro
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Oyenes, Florencia Belén
En este trabajo de investigación se evaluó in vitro la fermentación de β-glucanos por parte de bacterias intestinales. Para esto, en primer lugar, se analizó la composición de la microbiota intestinal presente en materia fecal de origen humano de cuatro (4) donantes sanos y de un pool conformado por las 4 muestras de los mismos (tiempo cero). Posteriormente, se realizaron los ensayos de fermentación in vitro, usando el pool de barros fecales para inocular medios de cultivo conteniendo diferentes carbohidratos (medio con β-glucanos, celobiosa e inulina y medio sin hidratos de carbono) a diferentes tiempos de incubación (24 y 48 h). Se evaluó la composición de la microbiota en los medios fermentados. El estudio de la composición de la microbiota de los medios fermentados así como del inóculo inicial (pool y muestras individuales) se realizó por amplificación de regiones hipervariables del gen que codifica para el ARNr 16S y secuenciación masiva de los amplicones. Los resultados obtenidos mostraron que inicialmente tanto en el pool como en las muestras individuales de materia fecal, el Phylum con mayor abundancia relativa fue Firmicutes, seguido por Bacteroidota y Proteobacteria, excepto en uno de los donantes donde se encontró como segundo Phylum en abundancia a Verrumicrobiota. Luego de la fermentación in vitro en las diferentes condiciones experimentales (medio con β-glucanos, glucosa, celobiosa y medio sin hidratos de carbono) este comportamiento se siguió manteniendo. Sin embargo, el Phylum Firmicutes incrementó su abundancia relativa en un 20% en el medio conteniendo β-glucanos en comparación con el medio sin hidratos de carbono, así como en comparación con el medio con glucosa. En los mismos ensayos de fermentación in vitro se evaluó además la producción de ácidos grasos de cadena corta: ácidos acético, propiónico y butírico. Los resultados de dichos experimentos mostraron que la producción de los tres ácidos estudiados (acético, propiónico y butírico), se incrementó en comparación con los valores presentes en el pool de materia fecal al tiempo cero, viéndose una mayor producción a las 48 h que a las 24 h. En el caso particular del medio con β-glucanos, se encontraron los tres ácidos evaluados con valores significativamente mayores al medio control sin carbohidratos. Al relacionar los resultados de la secuenciación de las poblaciones bacterianas y la producción de ácidos de cadena corta en la fermentación in vitro, concluimos que las poblaciones de bacterias típicamente productoras de butirato no fueron estimuladas en el medio conteniendo los β-glucanos. La secuenciación de poblaciones bacterianas reveló que la Familia Selenomonadaceae fue la más abundante en el medio con βglucanos. Si bien esta familia no se relaciona directamente con la producción de butirato, algunos autores encontraron que ciertas cepas de esta familia pueden producir butirato a través de vías metabólicas no típicas. Por otro lado, la Familia Prevotellaceae, que incluye bacterias productoras de butirato, se expresó más en presencia de celobiosa que en presencia de β-glucanos. Esto podría explicar el aumento en la producción de butirato en la condición con celobiosa. Finalmente, se evaluó la modulación de la respuesta inmune in vitro por parte de los diferentes ácidos estudiados. Para ello, se utilizó un modelo con células de la línea Caco-2/TC-7, que fueron tratadas con flagelina como estímulo proinflamatorio, y se analizó la expresión de la quimoquina CCL20 mediante qPCR. Los resultados de esta prueba demostraron que tanto el ácido acético como el propiónico tienen un efecto inmunomodulador sobre la expresión de dicho mediador inmunológico.
Puesta a punto y comparación del desempeño de un reactivo nacional contra métodos de rutina en el laboratorio bioquímico para la detección del Virus Sincicial Respiratorio (VSR) por RT-qPCR
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Viceconte, Sebastian
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido disminuye el uso innecesario de antibióticos y pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio bioquímico por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de multiplexado, es decir la detección de cuatro o cinco patógenos simultáneamente (dependiendo de la cantidad de canales del instrumento usado).
Productos derivados de membrana amniótica humana para tratamiento en la cicatrización de heridas complejas : estudio de mecanismos intervinientes en modelos in vitro e in vivo
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-03-15) Santa Cruz, Natalia Marisel
Ante una herida, se activan mecanismos biológicos orientados a su reparación, los cuales involucran múltiples procesos que ocurren en cascada. Las heridas complejas constituyen una elevada carga económica sobre los sistemas de salud y su tratamiento representa un desafío, especialmente las úlceras del pie diabético. En este contexto, los derivados de membrana amniótica humana (hAM) surgen como una estrategia tecnológica innovadora y no quirúrgica, que se presenta como una alternativa terapéutica segura, práctica y eficaz para promover la cicatrización. En este trabajo abordamos estrategias experimentales para el estudio de procesos involucrados en la reparación de heridas que permitieran evaluar el efecto de derivados de hAM en distintas condiciones. Para ello, realizamos ensayos de la herida in vitro para el estudio de la migración celular en una línea celular de fibroblasto (HT1080) en condiciones de alta glucosa. Además, llevamos a cabo un ensayo in vivo preliminar de cierre de la herida dérmica en un modelo animal de ratas con insulino resistencia. Los ensayos in vitro mostraron que hAM favoreció la migración de fibroblastos en condiciones normales, pero no tuvo efecto en condiciones de alta glucosa. En el ensayo in vivo preliminar, se observó un retraso en el cierre de la herida en los animales con insulino resistencia. Estos resultados demuestran que los modelos empleados son adecuados para estudiar la reparación de heridas, aunque en el caso del ensayo in vitro, es preciso ajustar las estrategias experimentales para evaluar con mayor precisión el impacto de hAM sobre la migración celular en condiciones de alta glucosa.
Puesta a punto de un método multiplex RT-qPCR en tiempo real para la detección de virus respiratorios de importancia sanitaria
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-05-03) Albarracin, Leila Evelyn
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad-mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico temprano disminuye el uso innecesario de antibióticos, pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio por su velocidad, sensibilidad, posibilidad de testeo simultáneo de muchas muestras y de multiplexado.
Aprovechamiento de residuos proteicos de la industria aceitera : obtención de hidrolizados y evaluación de las actividades antioxidante y antibacteriana
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Santone, Nadia Analía
El objetivo del presente trabajo final fue evaluar el uso de preparados enzimáticos de origen vegetal para obtener hidrolizados conteniendo péptidos bioactivos a partir de proteínas recuperadas desde desechos de la industria aceitera. Los hidrolizados fueron obtenidos enzimáticamente usando como sustrato el concentrado proteico de girasol (CPG) y como enzimas preparados proteolíticos vegetales obtenidos de Carica papaya y Pseudananas macrodontes. A efecto de caracterizar los hidrolizados se llevaron a cabo diferentes métodos experimentales: se les determinó la concentración de proteínas solubles mediante el método de Bradford y el grado de hidrólisis por el método del OPA (O-ftaldehído). Además, empleando Tricina-SDS-PAGE se estableció el patrón electroforético de la muestra original de proteínas de girasol que fue caracterizado y comparado con los perfiles peptídicos de los hidrolizados. Para determinar la presencia de péptidos bioactivos en los hidrolizados obtenidos se evaluó la actividad antioxidante empleando el método del DDPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) y también fue ensayada la actividad antimicrobiana.
Receptores TAM (TYRO3, AXL Y MERTK) y su papel en la diferenciación de macrófagos en el cáncer de mama triple negativo
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Salinas, Adrián Gastón
El cáncer de mama es la neoplasia más común a nivel global y la principal causa de muerte por cáncer en mujeres. Entre sus subtipos, el cáncer de mama triple negativo es el más agresivo y presenta menos opciones de tratamiento. Por esto, es esencial avanzar en la investigación sobre esta enfermedad y en la búsqueda de nuevos blancos terapéuticos. Los receptores TAM, que incluyen TYRO3, AXL y MERTK, son una familia de receptores de tirosina quinasa que se encuentran principalmente en células mieloides y juegan un papel crucial en la eliminación de células apoptóticas por los fagocitos. Sus ligandos más relevantes son GAS6 y la proteína S, los cuales actúan como puentes con la fosfatidilserina de las células apoptóticas. También se ha detectado una alta expresión de estos receptores y sus ligandos en células tumorales de diversas neoplasias, incluido el cáncer de mama, lo que se asocia con un peor pronóstico y una mayor formación de metástasis. Por ello, se han desarrollado inhibidores de estos receptores con fines terapéuticos, y estos están en diferentes etapas de ensayos clínicos. Aunque se han observado efectos directos de estos inhibidores sobre las células tumorales, también es esperable que influyan en las células inmunes presentes en el microambiente tumoral que los expresan. Los macrófagos son las células inmunes preponderantes en el microambiente tumoral y pueden contribuir a la progresión de la enfermedad y evasión inmune del tumor. Nuestra hipótesis es que la inhibición de estos receptores podría impactar en los macrófagos asociados a tumores, favoreciendo la activación de la respuesta inmune contra el tumor. El objetivo de este proyecto es investigar si los receptores TYRO3, AXL y MERTK y sus ligandos, modulan la respuesta inmune antitumoral en el cáncer de mama triple negativo. Para ello, se utilizarán modelos in vitro con medios condicionados de líneas de cáncer de mama triple negativo junto a monocitos/macrófagos obtenidos de sangre periférica de donantes sanos. Se evaluará el impacto del bloqueo de estos receptores y ligandos en el perfil y la función de estas células tanto in vitro.
Procedimientos e importancia de la verificación de desempeño de disolutor para los ensayos de disolución en los laboratorios de control de calidad para fármacos administrados oralmente
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Neira, Matias Emanuel
Verificación de los equipos 1 y 2 de disolutor cumpliendo especificaciones vigentes para luego analizar productos farmacéuticos de vía oral y corroborar la calidad de estos.
Caracterización molecular de un nuevo homólogo de proteínas de unión a ARN de la familia Csr/Rsm presente en bacteriófagos de Pseudomonas aeruginosa
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-04-18) Weinsinger Calvo, Malena
Este trabajo indaga acerca de uno de los fenómenos de regulación génica: la regulación post transcripcional. Para ello se sometió al sistema de señalización de dos componentes propio de la familia Pseudomonas; el sistema GacA/GacS a complementación fisiológica frente a la falta de uno de sus componentes fundamentales o dos de ellos en distintas cepas mutantes. En un reciente trabajo del laboratorio de Fisiología y Genética de Bacterias Beneficiosas para las plantas (LFGBBP) del Centro de Bioquímica y Microbiología del Suelo de la Universidad Nacional de Quilmes se llevó adelante un análisis por genómica comparativa para encontrar nuevos parálogos de proteínas de unión a ARN de la familia Csr/Rsm. Mediante este análisis, se describió la presencia de un parálogo llamado RsmM, que presenta una inusual topología estructural y que se encuentra en genomas de Pseudomonas aeruginosa en regiones donde está insertado un profago (estado latente de un bacteriofago a través de la inserción del mismo en el genoma de la bacteria hospedadora). Se obtuvieron resultados donde esta proteína pudo componer el sistema GacA/GacS en cepas mutante de Pseudomona protegens actuando como inhibidor de las diferentes proteínas precedidas en su marco de lectura por sitios de unión para proteínas Rsm y tituladas por RNA pequeños miméticos no codificantes. Se obtuvieron entonces resultados prometedores que plantean un buen indicio para futuras investigaciones de mayor complejidad en la misma línea.
Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-proteínas de capa-s de Lentilactobacillus Kefiri
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Vera, Estela Maris
La presencia de capa-S es una estructura proteica bidimensional auto-ensamblada que recubre completamente la superficie de los microorganismos que la poseen. En las bacterias patógenas, las proteínas de capa-S (SLP) podrían contribuir a los factores de virulencia a través de los mecanismos de adhesión, coagregación, protección contra la lisis por el sistema del complemento, etc… En Lentilactobacillus kefir se ha descripto la expresión de una única SLP en cada cepa de L. Kefir, con un PM relativo de 66 a 71KDa. L. kefir pertenece al género de los Lactobacillus, estas bacterias acido-lácticas se encuentran con frecuencia en diferentes ecosistemas naturales como plantas, alimentos, ensilajes, aguas residuales y el tracto gastrointestinal y genital de humanos y animales. La presencia de la capa-S se convierte en una característica adaptativa relevante para hacer frente a las condiciones adversas de esos ambientes. Además, como la capa-S constituye la estructura superficial más externa de estas células bacterianas, podría mediar la interacción de los microorganismos con diferentes células eucariotas, así como con la matriz extracelular y los componentes del mucus, hecho que se ha estudiado particularmente para las cepas de lactobacilos caracterizadas como probióticos. Por lo tanto, en el marco de este Trabajo Final, nos propusimos obtener hibridomas productores de Anticuerpos Monoclonales (AcMo) específicos contra proteína de capa-S de L. Kefir y evaluar la reactividad de los AcMo obtenidos frente a proteínas de capa-S de bacterias enteras de distintas cepas de L. Kefir. Se realizaron tres inmunizaciones a ratones BALB/c, por ruta intraperitoneal, con la SLP de L. Kefir cepa CIDCA 83111 (SLP-83111) como antígeno, y se evaluaron dos formulaciones adyuvantes: adyuvante de Freund completo y adyuvante de Freund incompleto. Se observó respuesta de anticuerpos IgG específicos en los 3 animales, los títulos alcanzados (determinados mediante ELISA indirecto) en los ratones inoculados aumentaron a medida que se avanzaba en el plan de inmunización. Además se realizó una fusión para la obtención de AcMo y los hibridomas resultantes fueron caracterizados por el método de Elisa indirecto, Dot-Blot e Inmunoblotting. Aquellos AcMo que presentaron reactividad frente a SLP-83111 se les realizó la clonación por dilución límite. Los hibridomas obtenidos fueron capaces de reconocer al antígeno sobre la bacteria entera en el ensayo de Dot-Blot, además de mostrar reactividad cruzada con otras cepas de L. Kefir (CIDCA 8335, CIDCA8343, CIDCA8348, CIDCA8311 y JCM 5818). Estos resultados sugieren que los AcMo obtenidos con capacidad de reconocer diferentes epítopes, podrían utilizarse como herramientas de ensayo para la detección inmunoquímica, cuantificación y caracterización de bacterias o proteínas de capa-S de las distintas cepas utilizadas en el presente trabajo.
Bacteriemias por bacilos Gram negativos en pacientes adultos asistidos en un hospital general de agudos : análisis de los hallazgos microbiológicos pre y post-pandemia COVID-19
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-03) Starone, Micaela A.
El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo, retrospectivo y descriptivo, de los episodios de bacteriemia por bacilos Gram negativos (BBGN) ocurridos durante Marzo/2017 a Diciembre/2019 (pre-COVID-19) y Marzo/2020 a Diciembre/2022 (intra/post-COVID-19), en adultos internados en un hospital del conurbano bonaerense. Se compararon sus características clínicas y demográficas, el foco de infección, el agente causal y su resistencia antimicrobiana (R). Resultados: La BBGN representó el 61,6% (648) y el 63,3% (633) de las bacteriemias en los respectivos períodos. Los pacientes tuvieron similitudes en cuanto a sexo y edad. Durante la pandemia se diagnosticó un porcentaje mayor de BBGN en pacientes hipertensos (p<0,05), y diabéticos y se redujo en pacientes de maternidad/obstetricia; el principal foco de bacteriemia fue la fiebre sin foco, con reducción de BBGN asociadas a foco renal y partes blandas (p<0,05). También se evidenció: un aumento de la tasa de positividad de los Hemocultivos (HC), de bacteriemias polimicrobianas, y de HC contaminados (p<0,05); un incremento de Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia y Acinetobacter spp (p<0,05); un aumento de la R en la mayoría de los antibióticos β-lactámicos en Enterobacterales donde la producción de β-lactamasa de espectro extendido aumentó del 36 al 42% y el porcentaje de producción de carbapenemasas del 11 al 29% (p<0,05); los antibióticos ensayados como alternativas terapéuticas presentaron resistencias superiores al 20%. Acinetobacter spp., presentó elevados niveles de R a la mayoría de los antimicrobianos ensayados, que se incrementaron durante la pandemia. Conclusión: durante la pandemia COVID-19 hubo un aumento significativo en los porcentajes de resistencia antimicrobiana en los BGN causantes de bacteriemia. Esto impone la necesidad de establecer medidas de control para evitar su diseminación, dadas las escasas opciones terapéuticas disponibles.
Validación de inmunoensayo quimioluminiscente de hormona Anti-Mülleriana
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-11-30) Patiño, Luz Macarena
La hormona Anti-Mülleriana recibe su nombre por su primera función descrita en la diferenciación sexual fetal, se une a receptores de membrana específico presente en células mesenquimales perimüllerianas, induciendo una regresión de los conductos de Müller en los niños de sexo masculino, durante la vida fetal temprana.2 La función que cumple esta hormona es la que le otorga relevancia clínica en neonatos, ya que sus niveles van a ser diferentes según el sexo cromosómico del infante, siendo de suma importancia para ver la concordancia entre el sexo cromosómico, sexo gonadal y sexo fenotípico, en la diferenciación y formación del feto. Además de promover en el naonato lo ya mencionado, estimula el descenso de los testículos al escroto. Debido a su relevancia clínica, el objetivo del trabajo es verificar el IR propuesto por el fabricante BECKMAN COULTER ACCESS Immunoassay Systems, utilizando como población de estudio, las muestras de 20 lactantes masculinos y 20 femeninos de 0 - 60 días de vida, que concurren al Laboratorio de Endocrinología del Hospital de Niños “SSM Ludovica” de La Plata, considerando las pautas de exclusión. Teniendo en cuenta los criterios de revalidación para intervalos de referencia, a partir de los resultados obtenidos, se concluyó que es posible transferir el intervalo de referencia para la medición de hormona Anti-Mülleriana a la población pediátrica de 0-60 días que asiste al Hospital, tanto para individuos del sexo masculino como para individuos del sexo femenino.
Aplicación de herramientas genómicas para el ensamblaje de cloroplastos de cannabis, su estudio filogenómico, y la evaluación de su potencial utilización en estudios de interés médico-científico
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Muriel, Leandro Pablo Nahuel
En varias partes del mundo se sigue teniendo el estigma de que el Cannabis es una droga ilícita y peligrosa. Se ha estudiado su uso a lo largo de los años, en diversos campos. Después del descubrimiento de los receptores cannabinoides y el estudio de la estructura y componentes del cannabis, surgió el interés del ámbito científico para medir sus capacidades medicinales. Entre estas aplicaciones contamos, por ejemplo, con tratamientos para trastornos de ansiedad, inhibición del crecimiento celular en cáncer de cuello uterino, y su utilización como antimicrobiano. Por ello, es importante poder distinguir entre diferentes cepas de Cannabis sativa, debido a que pueden contar con diversas características, como tener mayor potencial medicinal que recreativo o viceversa. Para este fin se analizará el cloroplasto de esta planta, cuya estructura y genoma están altamente conservados con una ligera variabilidad entre especies vegetales. Un método para lograr una identificación presuntiva entre las diferentes variedades, es el análisis de genes específicos (rbcL y matK) del ADN del cloroplasto. Es por ello que en este trabajo se utilizaron 2 programas bioinformáticos (Getorganelle y NOVOPlasty) para ensamblar cloroplastos a partir de 12 secuencias de genoma completo de Cannabis sativa, con el fin de realizar un análisis comparativo entre ambos programas, como así también entre los genes antes mencionados. Los resultados revelan que NOVOPlasty demostró una tasa de éxito superior en el ensamblaje en comparación con Getorganelle, logrando ensamblar 11 de los 12 cloroplastos, mientras que el segundo solo alcanzó 10. Cabe destacar que el único cloroplasto no ensamblado por NOVOPlasty, fue ensamblado correctamente por Getorganelle. Con la utilización de Bandage para una visualización preliminar del ensamblaje, se vio que un cloroplasto contaba con una cantidad de bases mayor que el resto, los que dieron iguales entre sí. Con los cloroplastos ensamblados correctamente se anotaron, y localizaron los genes rbcL y matK. El gen rbcL se mantuvo igual en las 12 secuencias, en cambio, el gen matK dio diferente en el cloroplasto con el mayor número de bases mencionado anteriormente.

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