Trabajos Finales (Bioquímica)

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Estudio epidemiológico retrospectivo sobre dengue en la región sanitaria VI y su proceso de diagnóstico serológico en el laboratorio de referencia
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Zalazar, Adrián
El país experimentó uno de los brotes más significativos de dengue en las últimas dos décadas durante el verano del año 2024. Esta situación generó una alerta tanto en los sistemas sanitarios regionales como en la población, debido al incremento de casos positivos y de muertes asociadas a la infección por el virus del dengue, el cual forma parte de la familia de las arbovirosis, un grupo de virus transmitidos por artrópodos. En particular, el dengue es transmitido por el mosquito hembra Aedes aegypti previamente infectado. Este virus se caracteriza por la existencia de cuatro variantes de serotipos: DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4, que están estrechamente relacionadas entre sí. A pesar de su parentesco evolutivo, cada serotipo induce una respuesta inmunitaria distinta frente a antígenos específicos, lo que constituye una amenaza significativa para la salud pública a nivel global. La patología asociada con este virus es conocida como fiebre por dengue, y sus manifestaciones graves incluyen la hemorragia por dengue y el shock por dengue. Las infecciones por dengue se presentan predominantemente en regiones tropicales y subtropicales, que constituyen ambientes favorables para la proliferación del mosquito vector del virus (1). En los seres humanos, el dengue se manifiesta a través de un espectro clínico que abarca desde un síndrome febril agudo de carácter inespecífico hasta cuadros de enfermedad hemorrágica severa, los cuales pueden resultar en fatalidad. El período de incubación, es decir, el intervalo transcurrido desde la infección hasta la presentación de los síntomas generalmente oscila entre 4 y 10 días. El presente estudio tiene como objetivo analizar la epidemiología del dengue en la región, evaluar su impacto y examinar los métodos de diagnóstico serológico empleados en el laboratorio de referencia. Además, se busca comprender la relación y la importancia de proporcionar información pertinente en el contexto de la Red de Asistencia de Salud Pública, que interactúa con los diversos centros de salud, hospitales y Unidades de Pronta Atención (UPA) de los distintos municipios que integran la Región Sanitaria VI.
Fermentación de betaglucanos por la microbiota intestinal : Modificación de poblaciones bacterianas, producción de ácidos grasos de cadena corta y actividad inmunomodulatoria in vitro
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Oyenes, Florencia Belén
En este trabajo de investigación se evaluó in vitro la fermentación de β-glucanos por parte de bacterias intestinales. Para esto, en primer lugar, se analizó la composición de la microbiota intestinal presente en materia fecal de origen humano de cuatro (4) donantes sanos y de un pool conformado por las 4 muestras de los mismos (tiempo cero). Posteriormente, se realizaron los ensayos de fermentación in vitro, usando el pool de barros fecales para inocular medios de cultivo conteniendo diferentes carbohidratos (medio con β-glucanos, celobiosa e inulina y medio sin hidratos de carbono) a diferentes tiempos de incubación (24 y 48 h). Se evaluó la composición de la microbiota en los medios fermentados. El estudio de la composición de la microbiota de los medios fermentados así como del inóculo inicial (pool y muestras individuales) se realizó por amplificación de regiones hipervariables del gen que codifica para el ARNr 16S y secuenciación masiva de los amplicones. Los resultados obtenidos mostraron que inicialmente tanto en el pool como en las muestras individuales de materia fecal, el Phylum con mayor abundancia relativa fue Firmicutes, seguido por Bacteroidota y Proteobacteria, excepto en uno de los donantes donde se encontró como segundo Phylum en abundancia a Verrumicrobiota. Luego de la fermentación in vitro en las diferentes condiciones experimentales (medio con β-glucanos, glucosa, celobiosa y medio sin hidratos de carbono) este comportamiento se siguió manteniendo. Sin embargo, el Phylum Firmicutes incrementó su abundancia relativa en un 20% en el medio conteniendo β-glucanos en comparación con el medio sin hidratos de carbono, así como en comparación con el medio con glucosa. En los mismos ensayos de fermentación in vitro se evaluó además la producción de ácidos grasos de cadena corta: ácidos acético, propiónico y butírico. Los resultados de dichos experimentos mostraron que la producción de los tres ácidos estudiados (acético, propiónico y butírico), se incrementó en comparación con los valores presentes en el pool de materia fecal al tiempo cero, viéndose una mayor producción a las 48 h que a las 24 h. En el caso particular del medio con β-glucanos, se encontraron los tres ácidos evaluados con valores significativamente mayores al medio control sin carbohidratos. Al relacionar los resultados de la secuenciación de las poblaciones bacterianas y la producción de ácidos de cadena corta en la fermentación in vitro, concluimos que las poblaciones de bacterias típicamente productoras de butirato no fueron estimuladas en el medio conteniendo los β-glucanos. La secuenciación de poblaciones bacterianas reveló que la Familia Selenomonadaceae fue la más abundante en el medio con βglucanos. Si bien esta familia no se relaciona directamente con la producción de butirato, algunos autores encontraron que ciertas cepas de esta familia pueden producir butirato a través de vías metabólicas no típicas. Por otro lado, la Familia Prevotellaceae, que incluye bacterias productoras de butirato, se expresó más en presencia de celobiosa que en presencia de β-glucanos. Esto podría explicar el aumento en la producción de butirato en la condición con celobiosa. Finalmente, se evaluó la modulación de la respuesta inmune in vitro por parte de los diferentes ácidos estudiados. Para ello, se utilizó un modelo con células de la línea Caco-2/TC-7, que fueron tratadas con flagelina como estímulo proinflamatorio, y se analizó la expresión de la quimoquina CCL20 mediante qPCR. Los resultados de esta prueba demostraron que tanto el ácido acético como el propiónico tienen un efecto inmunomodulador sobre la expresión de dicho mediador inmunológico.
Puesta a punto y comparación del desempeño de un reactivo nacional contra métodos de rutina en el laboratorio bioquímico para la detección del Virus Sincicial Respiratorio (VSR) por RT-qPCR
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-04-04) Viceconte, Sebastian
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad y mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico preciso y rápido disminuye el uso innecesario de antibióticos y pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio bioquímico por su velocidad, sensibilidad y la posibilidad de multiplexado, es decir la detección de cuatro o cinco patógenos simultáneamente (dependiendo de la cantidad de canales del instrumento usado).
Productos derivados de membrana amniótica humana para tratamiento en la cicatrización de heridas complejas : estudio de mecanismos intervinientes en modelos in vitro e in vivo
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2025-03-15) Santa Cruz, Natalia Marisel
Ante una herida, se activan mecanismos biológicos orientados a su reparación, los cuales involucran múltiples procesos que ocurren en cascada. Las heridas complejas constituyen una elevada carga económica sobre los sistemas de salud y su tratamiento representa un desafío, especialmente las úlceras del pie diabético. En este contexto, los derivados de membrana amniótica humana (hAM) surgen como una estrategia tecnológica innovadora y no quirúrgica, que se presenta como una alternativa terapéutica segura, práctica y eficaz para promover la cicatrización. En este trabajo abordamos estrategias experimentales para el estudio de procesos involucrados en la reparación de heridas que permitieran evaluar el efecto de derivados de hAM en distintas condiciones. Para ello, realizamos ensayos de la herida in vitro para el estudio de la migración celular en una línea celular de fibroblasto (HT1080) en condiciones de alta glucosa. Además, llevamos a cabo un ensayo in vivo preliminar de cierre de la herida dérmica en un modelo animal de ratas con insulino resistencia. Los ensayos in vitro mostraron que hAM favoreció la migración de fibroblastos en condiciones normales, pero no tuvo efecto en condiciones de alta glucosa. En el ensayo in vivo preliminar, se observó un retraso en el cierre de la herida en los animales con insulino resistencia. Estos resultados demuestran que los modelos empleados son adecuados para estudiar la reparación de heridas, aunque en el caso del ensayo in vitro, es preciso ajustar las estrategias experimentales para evaluar con mayor precisión el impacto de hAM sobre la migración celular en condiciones de alta glucosa.
Puesta a punto de un método multiplex RT-qPCR en tiempo real para la detección de virus respiratorios de importancia sanitaria
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-05-03) Albarracin, Leila Evelyn
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por VSR es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad-mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico temprano disminuye el uso innecesario de antibióticos, pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio por su velocidad, sensibilidad, posibilidad de testeo simultáneo de muchas muestras y de multiplexado.
Aprovechamiento de residuos proteicos de la industria aceitera : obtención de hidrolizados y evaluación de las actividades antioxidante y antibacteriana
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Santone, Nadia Analía
El objetivo del presente trabajo final fue evaluar el uso de preparados enzimáticos de origen vegetal para obtener hidrolizados conteniendo péptidos bioactivos a partir de proteínas recuperadas desde desechos de la industria aceitera. Los hidrolizados fueron obtenidos enzimáticamente usando como sustrato el concentrado proteico de girasol (CPG) y como enzimas preparados proteolíticos vegetales obtenidos de Carica papaya y Pseudananas macrodontes. A efecto de caracterizar los hidrolizados se llevaron a cabo diferentes métodos experimentales: se les determinó la concentración de proteínas solubles mediante el método de Bradford y el grado de hidrólisis por el método del OPA (O-ftaldehído). Además, empleando Tricina-SDS-PAGE se estableció el patrón electroforético de la muestra original de proteínas de girasol que fue caracterizado y comparado con los perfiles peptídicos de los hidrolizados. Para determinar la presencia de péptidos bioactivos en los hidrolizados obtenidos se evaluó la actividad antioxidante empleando el método del DDPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) y también fue ensayada la actividad antimicrobiana.
Receptores TAM (TYRO3, AXL Y MERTK) y su papel en la diferenciación de macrófagos en el cáncer de mama triple negativo
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Salinas, Adrián Gastón
El cáncer de mama es la neoplasia más común a nivel global y la principal causa de muerte por cáncer en mujeres. Entre sus subtipos, el cáncer de mama triple negativo es el más agresivo y presenta menos opciones de tratamiento. Por esto, es esencial avanzar en la investigación sobre esta enfermedad y en la búsqueda de nuevos blancos terapéuticos. Los receptores TAM, que incluyen TYRO3, AXL y MERTK, son una familia de receptores de tirosina quinasa que se encuentran principalmente en células mieloides y juegan un papel crucial en la eliminación de células apoptóticas por los fagocitos. Sus ligandos más relevantes son GAS6 y la proteína S, los cuales actúan como puentes con la fosfatidilserina de las células apoptóticas. También se ha detectado una alta expresión de estos receptores y sus ligandos en células tumorales de diversas neoplasias, incluido el cáncer de mama, lo que se asocia con un peor pronóstico y una mayor formación de metástasis. Por ello, se han desarrollado inhibidores de estos receptores con fines terapéuticos, y estos están en diferentes etapas de ensayos clínicos. Aunque se han observado efectos directos de estos inhibidores sobre las células tumorales, también es esperable que influyan en las células inmunes presentes en el microambiente tumoral que los expresan. Los macrófagos son las células inmunes preponderantes en el microambiente tumoral y pueden contribuir a la progresión de la enfermedad y evasión inmune del tumor. Nuestra hipótesis es que la inhibición de estos receptores podría impactar en los macrófagos asociados a tumores, favoreciendo la activación de la respuesta inmune contra el tumor. El objetivo de este proyecto es investigar si los receptores TYRO3, AXL y MERTK y sus ligandos, modulan la respuesta inmune antitumoral en el cáncer de mama triple negativo. Para ello, se utilizarán modelos in vitro con medios condicionados de líneas de cáncer de mama triple negativo junto a monocitos/macrófagos obtenidos de sangre periférica de donantes sanos. Se evaluará el impacto del bloqueo de estos receptores y ligandos en el perfil y la función de estas células tanto in vitro.
Procedimientos e importancia de la verificación de desempeño de disolutor para los ensayos de disolución en los laboratorios de control de calidad para fármacos administrados oralmente
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-12-20) Neira, Matias Emanuel
Verificación de los equipos 1 y 2 de disolutor cumpliendo especificaciones vigentes para luego analizar productos farmacéuticos de vía oral y corroborar la calidad de estos.
Caracterización molecular de un nuevo homólogo de proteínas de unión a ARN de la familia Csr/Rsm presente en bacteriófagos de Pseudomonas aeruginosa
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-04-18) Weinsinger Calvo, Malena
Este trabajo indaga acerca de uno de los fenómenos de regulación génica: la regulación post transcripcional. Para ello se sometió al sistema de señalización de dos componentes propio de la familia Pseudomonas; el sistema GacA/GacS a complementación fisiológica frente a la falta de uno de sus componentes fundamentales o dos de ellos en distintas cepas mutantes. En un reciente trabajo del laboratorio de Fisiología y Genética de Bacterias Beneficiosas para las plantas (LFGBBP) del Centro de Bioquímica y Microbiología del Suelo de la Universidad Nacional de Quilmes se llevó adelante un análisis por genómica comparativa para encontrar nuevos parálogos de proteínas de unión a ARN de la familia Csr/Rsm. Mediante este análisis, se describió la presencia de un parálogo llamado RsmM, que presenta una inusual topología estructural y que se encuentra en genomas de Pseudomonas aeruginosa en regiones donde está insertado un profago (estado latente de un bacteriofago a través de la inserción del mismo en el genoma de la bacteria hospedadora). Se obtuvieron resultados donde esta proteína pudo componer el sistema GacA/GacS en cepas mutante de Pseudomona protegens actuando como inhibidor de las diferentes proteínas precedidas en su marco de lectura por sitios de unión para proteínas Rsm y tituladas por RNA pequeños miméticos no codificantes. Se obtuvieron entonces resultados prometedores que plantean un buen indicio para futuras investigaciones de mayor complejidad en la misma línea.
Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-proteínas de capa-s de Lentilactobacillus Kefiri
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Vera, Estela Maris
La presencia de capa-S es una estructura proteica bidimensional auto-ensamblada que recubre completamente la superficie de los microorganismos que la poseen. En las bacterias patógenas, las proteínas de capa-S (SLP) podrían contribuir a los factores de virulencia a través de los mecanismos de adhesión, coagregación, protección contra la lisis por el sistema del complemento, etc… En Lentilactobacillus kefir se ha descripto la expresión de una única SLP en cada cepa de L. Kefir, con un PM relativo de 66 a 71KDa. L. kefir pertenece al género de los Lactobacillus, estas bacterias acido-lácticas se encuentran con frecuencia en diferentes ecosistemas naturales como plantas, alimentos, ensilajes, aguas residuales y el tracto gastrointestinal y genital de humanos y animales. La presencia de la capa-S se convierte en una característica adaptativa relevante para hacer frente a las condiciones adversas de esos ambientes. Además, como la capa-S constituye la estructura superficial más externa de estas células bacterianas, podría mediar la interacción de los microorganismos con diferentes células eucariotas, así como con la matriz extracelular y los componentes del mucus, hecho que se ha estudiado particularmente para las cepas de lactobacilos caracterizadas como probióticos. Por lo tanto, en el marco de este Trabajo Final, nos propusimos obtener hibridomas productores de Anticuerpos Monoclonales (AcMo) específicos contra proteína de capa-S de L. Kefir y evaluar la reactividad de los AcMo obtenidos frente a proteínas de capa-S de bacterias enteras de distintas cepas de L. Kefir. Se realizaron tres inmunizaciones a ratones BALB/c, por ruta intraperitoneal, con la SLP de L. Kefir cepa CIDCA 83111 (SLP-83111) como antígeno, y se evaluaron dos formulaciones adyuvantes: adyuvante de Freund completo y adyuvante de Freund incompleto. Se observó respuesta de anticuerpos IgG específicos en los 3 animales, los títulos alcanzados (determinados mediante ELISA indirecto) en los ratones inoculados aumentaron a medida que se avanzaba en el plan de inmunización. Además se realizó una fusión para la obtención de AcMo y los hibridomas resultantes fueron caracterizados por el método de Elisa indirecto, Dot-Blot e Inmunoblotting. Aquellos AcMo que presentaron reactividad frente a SLP-83111 se les realizó la clonación por dilución límite. Los hibridomas obtenidos fueron capaces de reconocer al antígeno sobre la bacteria entera en el ensayo de Dot-Blot, además de mostrar reactividad cruzada con otras cepas de L. Kefir (CIDCA 8335, CIDCA8343, CIDCA8348, CIDCA8311 y JCM 5818). Estos resultados sugieren que los AcMo obtenidos con capacidad de reconocer diferentes epítopes, podrían utilizarse como herramientas de ensayo para la detección inmunoquímica, cuantificación y caracterización de bacterias o proteínas de capa-S de las distintas cepas utilizadas en el presente trabajo.
Bacteriemias por bacilos Gram negativos en pacientes adultos asistidos en un hospital general de agudos : análisis de los hallazgos microbiológicos pre y post-pandemia COVID-19
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-03) Starone, Micaela A.
El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo, retrospectivo y descriptivo, de los episodios de bacteriemia por bacilos Gram negativos (BBGN) ocurridos durante Marzo/2017 a Diciembre/2019 (pre-COVID-19) y Marzo/2020 a Diciembre/2022 (intra/post-COVID-19), en adultos internados en un hospital del conurbano bonaerense. Se compararon sus características clínicas y demográficas, el foco de infección, el agente causal y su resistencia antimicrobiana (R). Resultados: La BBGN representó el 61,6% (648) y el 63,3% (633) de las bacteriemias en los respectivos períodos. Los pacientes tuvieron similitudes en cuanto a sexo y edad. Durante la pandemia se diagnosticó un porcentaje mayor de BBGN en pacientes hipertensos (p<0,05), y diabéticos y se redujo en pacientes de maternidad/obstetricia; el principal foco de bacteriemia fue la fiebre sin foco, con reducción de BBGN asociadas a foco renal y partes blandas (p<0,05). También se evidenció: un aumento de la tasa de positividad de los Hemocultivos (HC), de bacteriemias polimicrobianas, y de HC contaminados (p<0,05); un incremento de Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia y Acinetobacter spp (p<0,05); un aumento de la R en la mayoría de los antibióticos β-lactámicos en Enterobacterales donde la producción de β-lactamasa de espectro extendido aumentó del 36 al 42% y el porcentaje de producción de carbapenemasas del 11 al 29% (p<0,05); los antibióticos ensayados como alternativas terapéuticas presentaron resistencias superiores al 20%. Acinetobacter spp., presentó elevados niveles de R a la mayoría de los antimicrobianos ensayados, que se incrementaron durante la pandemia. Conclusión: durante la pandemia COVID-19 hubo un aumento significativo en los porcentajes de resistencia antimicrobiana en los BGN causantes de bacteriemia. Esto impone la necesidad de establecer medidas de control para evitar su diseminación, dadas las escasas opciones terapéuticas disponibles.
Validación de inmunoensayo quimioluminiscente de hormona Anti-Mülleriana
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-11-30) Patiño, Luz Macarena
La hormona Anti-Mülleriana recibe su nombre por su primera función descrita en la diferenciación sexual fetal, se une a receptores de membrana específico presente en células mesenquimales perimüllerianas, induciendo una regresión de los conductos de Müller en los niños de sexo masculino, durante la vida fetal temprana.2 La función que cumple esta hormona es la que le otorga relevancia clínica en neonatos, ya que sus niveles van a ser diferentes según el sexo cromosómico del infante, siendo de suma importancia para ver la concordancia entre el sexo cromosómico, sexo gonadal y sexo fenotípico, en la diferenciación y formación del feto. Además de promover en el naonato lo ya mencionado, estimula el descenso de los testículos al escroto. Debido a su relevancia clínica, el objetivo del trabajo es verificar el IR propuesto por el fabricante BECKMAN COULTER ACCESS Immunoassay Systems, utilizando como población de estudio, las muestras de 20 lactantes masculinos y 20 femeninos de 0 - 60 días de vida, que concurren al Laboratorio de Endocrinología del Hospital de Niños “SSM Ludovica” de La Plata, considerando las pautas de exclusión. Teniendo en cuenta los criterios de revalidación para intervalos de referencia, a partir de los resultados obtenidos, se concluyó que es posible transferir el intervalo de referencia para la medición de hormona Anti-Mülleriana a la población pediátrica de 0-60 días que asiste al Hospital, tanto para individuos del sexo masculino como para individuos del sexo femenino.
Aplicación de herramientas genómicas para el ensamblaje de cloroplastos de cannabis, su estudio filogenómico, y la evaluación de su potencial utilización en estudios de interés médico-científico
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Muriel, Leandro Pablo Nahuel
En varias partes del mundo se sigue teniendo el estigma de que el Cannabis es una droga ilícita y peligrosa. Se ha estudiado su uso a lo largo de los años, en diversos campos. Después del descubrimiento de los receptores cannabinoides y el estudio de la estructura y componentes del cannabis, surgió el interés del ámbito científico para medir sus capacidades medicinales. Entre estas aplicaciones contamos, por ejemplo, con tratamientos para trastornos de ansiedad, inhibición del crecimiento celular en cáncer de cuello uterino, y su utilización como antimicrobiano. Por ello, es importante poder distinguir entre diferentes cepas de Cannabis sativa, debido a que pueden contar con diversas características, como tener mayor potencial medicinal que recreativo o viceversa. Para este fin se analizará el cloroplasto de esta planta, cuya estructura y genoma están altamente conservados con una ligera variabilidad entre especies vegetales. Un método para lograr una identificación presuntiva entre las diferentes variedades, es el análisis de genes específicos (rbcL y matK) del ADN del cloroplasto. Es por ello que en este trabajo se utilizaron 2 programas bioinformáticos (Getorganelle y NOVOPlasty) para ensamblar cloroplastos a partir de 12 secuencias de genoma completo de Cannabis sativa, con el fin de realizar un análisis comparativo entre ambos programas, como así también entre los genes antes mencionados. Los resultados revelan que NOVOPlasty demostró una tasa de éxito superior en el ensamblaje en comparación con Getorganelle, logrando ensamblar 11 de los 12 cloroplastos, mientras que el segundo solo alcanzó 10. Cabe destacar que el único cloroplasto no ensamblado por NOVOPlasty, fue ensamblado correctamente por Getorganelle. Con la utilización de Bandage para una visualización preliminar del ensamblaje, se vio que un cloroplasto contaba con una cantidad de bases mayor que el resto, los que dieron iguales entre sí. Con los cloroplastos ensamblados correctamente se anotaron, y localizaron los genes rbcL y matK. El gen rbcL se mantuvo igual en las 12 secuencias, en cambio, el gen matK dio diferente en el cloroplasto con el mayor número de bases mencionado anteriormente.
Estudio in vitro de la potencialidad de polisacáridos para ser utilizados en alimentos funcionales
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-04-17) Moreira, Natalia Soledad
En este trabajo se evaluaron las características estructurales de polisacáridos aislados a partir de subproductos de la industria alimentaria. Mediante espectroscopía FTIR se comprobó que los polímeros coinciden con lo descrito en bibliografía y, por lo tanto, podemos concluir que se pueden obtener polisacáridos con un grado de pureza aceptable mediante metodologías relativamente sencillas y amigables con el ambiente. Por otro lado, se evaluó la capacidad de los polisacáridos para ser utilizados como fuente de carbohidratos por una cepa probiótica comercial de Lacticaseibacillus casei 01 de la compañía ChHansen, se encontró que el kefiran permite el desarrollo de los microorganismos de un modo similar al medio con glucosa, por tanto, se podría postular que este polisacárido podría ser adecuado para un synbiotico sinérgico. Además, en el medio con dextranos no se observó un crecimiento de los microorganismos dado que se mantuvieron en un número similar al medio sin azúcar y diferente estadísticamente del medio con glucosa por lo que indicaría que Lacticaseibacillus casei 01 no es capaces de fermentar este polisacárido, por lo tanto, tendría potencialidad para ser utilizado en un synbiotico complementario. Adicionalmente se evaluó in vitro la fermentación de los polisacáridos por las bacterias intestinales de 8 donantes seleccionados, en cuanto a la producción de butirato y en cuanto a la producción de ácidos grasos de cadena ramificada (ácidos isobutírico e isovalerico). Respecto a estos resultados, en el caso de la producción de butirato como producto de fermentación, se pudo observar que la microbiota perteneciente al control (sin patologías) responde frente a los dextranos, pero esto no se repite para los individuos que presentan pólipos intestinales, ni para los individuos que padecen colitis ulcerosa. Con respecto a la producción de ácidos ramificados, se pudo observar que el kefiran fue el polisacárido con el cual se produjo mayor cantidad de ácido isobutírico e isovalerico en la mayoría de los casos. Además, se observaron diferencias entre individuos en cuanto a la producción de estos ácidos ramificados. Los resultados alcanzados luego del cumplimiento de los objetivos de este trabajo final constituyen un aporte a la comprensión de la respuesta individual de la microbiota intestinal frente a un estímulo dietario. La inclusión de donantes de muestras de materia fecal con patologías intestinales de origen inflamatorio es relevante para comparación de la respuesta entre individuos con y sin patologías frente a la administración de un prebiótico.
Puesta a punto de un método multiplex RT-qPCR en tiempo real para la detección de virus respiratorios de importancia sanitaria
(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2024-04-16) Albarracin, Leila Evelyn
La infección respiratoria aguda (IRA) producida por el Virus Respiratorio Sincicial (RVS) es una de las principales causas de hospitalizaciones de lactantes y niños y de una elevada morbilidad-mortalidad entre ancianos y adultos con condiciones debilitantes subyacentes. El diagnóstico temprano disminuye el uso innecesario de antibióticos, pruebas adicionales de laboratorio, el tiempo de hospitalización y la transmisión intrahospitalaria. La PCR en tiempo real es una metodología adecuada para su utilización en el laboratorio por su velocidad, sensibilidad, posibilidad de testeo simultáneo de muchas muestras y demultiplexado. En el contexto del siguiente proyecto se va a intentar extender el rango de virus detectados combinando el desarrollo de Mancini con técnicas para la detección de otros dos patógenos respiratorios. En particular se trabajará en el estudio de la compatibilidad del desarrollo de Mancini con sus primer y probe con los correspondientes a las real time PCRs para rinovirus (HRV) de Marcone y colaboradores (Marcone et al., 2012) y la de Fry y colaboradores para virus sincicial respiratorio (Fry et al., 2010).
Evaluación de la actividad letal y repelente de extractos de Cannabis sativa en combinación con inhibidores de enzimas detoxificantes en ninfas de Triatoma infestans
(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) Leonart, Tamara Luján
En la actualidad, la enfermedad de Chagas constituye un problema de salud pública en el territorio nacional. Esta zoonosis es transmitida por insectos triatominos. En Argentina, el principal vector de la enfermedad es Triatoma infestans, popularmente conocida como vinchuca. Este vector pica en zonas expuestas de la piel y defeca, permitiendo la entrada al torrente sanguíneo del parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Mientras que en etapas tempranas puede tratarse con antiparasitarios y curarse, una vez instalada la cronicidad del cuadro es muy difícil tratarlo y son más frecuentes las complicaciones, por lo tanto, es indispensable el diagnóstico temprano. Como es una enfermedad asociada a zonas rurales y pobres, el acceso del personal de salud es complejo, en consecuencia, desde hace años las políticas públicas apuntan al control vectorial, entre otras estrategias, para disminuir la cantidad de infectados. En la actualidad, la principal herramienta para el control de los triatominos es el uso de insecticidas sintéticos del grupo químico piretroides. Los reportes publicados sobre la presencia de poblaciones de vinchucas resistentes a este químico pone en juego el éxito final del control del vector. En este contexto, se plantea el requerimiento de nuevos métodos efectivos para disminuir las poblaciones del insecto. La alternativa que se explora en estudios recientes es el uso de bioinsecticidas. En este trabajo se evaluó la letalidad y repelencia de los extractos acetónicos y etanólicos de Cannabis sativa y el D-limoneno sobre T. infestans, evaluando su interacción con inhibidores de enzimas detoxificantes, butóxido de piperonilo (PBO) y trifenil fosfato (TPP). Los resultados apuntaron a una efectividad mayor cuando los extractos y el limoneno se pre incubaron con PBO, mientras que TPP no tuvo acción sobre el extracto etanólico. La repelencia fue de 100% para los tres compuestos evaluados a 50μg/cm2 sostenidos durante 48 hs. El extracto acetónico tuvo mejor performance en relación a los parámetros del tiempo y potencia repelente. Del mismo modo, fue el mejor sinergista de la deltametrina, frente a JET y el D-limoneno con un IC de 0.35.
Proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri como template y estabilizante para la obtención de nanopartículas de oro : Aplicación en detección colorimétrica de arsénico en agua
(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) Laserna, Daniela Alejandra
El aumento de la demanda de agua potable ha llevado a un creciente interés en la calidad del agua subterránea. En este contexto, la contaminación por arsénico ha surgido como una preocupación significativa debido a su toxicidad para los humanos. Argentina, junto con Chile y México, se encuentra entre los países más afectados por la contaminación de arsénico en el agua. A pesar de los esfuerzos normativos, los límites permitidos de concentración de arsénico no se han cumplido completamente. La exposición continua a niveles altos de arsénico puede provocar problemas de salud graves, como el HACRE que puede derivar a cáncer de piel, afectaciones en órganos vitales y, en casos extremos, la muerte. Este estudio aborda la necesidad de desarrollar un sistema-biosensor para la detección de arsénico, utilizando proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri. Estas proteínas, conocidas por su capacidad de autoensamblaje, se han utilizado en la síntesis y estabilización de nanopartículas de oro. Las propiedades ópticas de estas nanopartículas, fenómeno de resonancia de plasmon superficial localizado, permiten la detección colorimétrica de arsénico, ofreciendo una alternativa efectiva para monitorear la contaminación en el agua. El trabajo aborda el proceso de cultivo y caracterización de las SLP. Luego, la obtención de nanobiosistemas utilizando nanopartículas de oro (AuNPs) estabilizadas y soportadas con proteínas de capa-S para la detección de arsénico. Se utilizaron tres métodos de reducción: H2, H2 seguido de NaBH4 y ácido cítrico para la obtención de nanopartículas de oro coloidales. Se realizaron pruebas de estabilidad frente a fuerzas iónicas mediante un test de sal. Se seleccionó un sistema específico que cumplió con criterios de estabilidad visual y espectroscópica. Este sistema seleccionado se propone como un potencial biosensor para la detección de arsénico. El estudio para la detección de arsénico (V) en medio acuoso a través del monitoreo el corrimiento del máximo de longitud de onda por la agregación de las nanopartículas en presencia del arsénico. En general, el nanobiosensor desarrollado, mostró una sensibilidad significativa para la detección de arsénico, sentando las bases para posibles aplicaciones futuras en la detección cuantitativa de este contaminante en aguas. Se evaluó la interferencia en la respuesta del biosensor frente a diferentes metales, con un enfoque particular en metales comunes en aguas de red. Se utilizaron concentraciones de metales no representativas de las aguas de red. Se realizaron análisis mediante espectroscopía UV-vis y observación visual. La respuesta del biosensor no fue idéntica para todos los analitos, a pesar de interacciones metal-ligando convencionales. Se concluye que algunos metales pueden interferir en la detección de arsénico, pero a concentraciones elevadas que no reflejan la realidad en aguas de red. Además, la naturaleza específica de las interacciones entre los metales y las proteínas de capas-S podría ser un área de interés para investigaciones futuras. Este estudio presenta un enfoque completo y detallado sobre la síntesis de nanopartículas de oro y su aplicación en la detección de arsénico. La identificación de interferentes y la consideración de condiciones realistas en el agua potable son aspectos valiosos. Las limitaciones identificadas ofrecen oportunidades para mejoras futuras en la sensibilidad y especificidad del biosensor.
Prevalencia de carbapenemasas en pacientes internados durante la pandemia por SARS-CoV2
(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2024-03-18) Cano, Valeria Fabiana
Las carbapenemasas son enzimas producidas por bacterias gram-negativas que hidrolizan a los carbapenémicos y que confieren, en la mayoría de las ocasiones, resistencia a los mismos y a todos los beta-lactámicos. Existen diferentes tipos de carbapenemasas, el grupo con más interés clínico son las carbapenemasas KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase), ya que a menudo, las cepas productoras de KPC son productoras de otras beta-lactamasas, lo que complica un tratamiento efectivo y, además, son las más frecuentes. La frecuencia de infección con bacterias productoras de KPC ha sido asociada con hospitalización prolongada, estadía en unidades de cuidados intensivos, pacientes inmunodeprimidos, dispositivos invasores, terapia antimicrobiana previa, ventilaciónmecánica, etc, situaciones muy presentes durante la pandemia por SARS-CoV2. A partir de lo dicho, se deduce la importancia del presente trabajo en resaltar la vigilancia epidemiológica de las infecciones por KPC, especialmente en situaciones especiales, a fin de minimizar la morbilidad y mortalidad de los pacientes involucrados. En este trabajo, evaluamos la incidencia de colonización de bacterias productoras decarbapenemasas en pacientes internados durante la pandemia de COVID19.
Análisis retrospectivo y comparativo de la seroprevalencia de sifilis gestacional pre y post pandemia de covid-19 en pacientes que asistieron al Hospital subzonal materno infantil Dr. Eduardo Oller
(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) Bravo Arriola, Flora
La sífilis es una infección de transmisión sexual causada por la bacteria Treponema pallidum. Los casos de infección han ido en aumento en los últimos años a nivel mundial. La Organismo Panamericana de la Salud (OPS) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) la definen como un problema de salud pública. Es una infección que puede transmitirse por vía sexual, transplacentaria y por transfusión de sangre infectada. La transmisión transplacentaria se produce por el paso del microorganismo a través de la placenta al bebe en cualquier etapa del embarazo. La sífilis congénita puede producir partos prematuros, malformaciones, sífilis activa en el neonato, mortalidad fetal o neonatal. Es una enfermedad prevenible que a nivel global es la principal causa de muertes fetales. Por esta razón es importante el control de las embarazadas en cada trimestre del embarazo. Realizamos un estudio descriptivo, retrospectivo y transversal de los datos con los que contamos en el laboratorio del Hospital Dr. Eduardo Oller para determinar la seroprevalencia de sífilis en la población que asiste a este hospital antes (2019) y después de la pandemia (2022). Pudimos observar según la recopilación de datos que durante el 2022 realizamos menor cantidad de VDRL y sin embargo el porcentaje de reactivos fueron similares 5,24% en 2019 y 5,54% en 2022. Diferenciando los casos reactivos por edad pudimos observar que se produjeron mayormente en una población en edad fértil y durante el 2022 la población infectada es cada vez más joven. Además, notamos que hay una mayor frecuencia de detección en mujeres debido a que estas vienen a más controles, en especial las mujeres gestantes. Detectamos que se produjo un aumento de serología positiva para sífilis en gestantes de 5,6% en 2019 a 8,15% en 2022 y que los controles durante la gestación fueron importantes en la detección de esta infección.
Evaluación de la producción de celulosa en el sistema kombucha : Aislamiento e identificación de microorganismos productores del polímero
(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2022) Vildozo, María Laura
La kombucha es una bebida elaborada a partir de té azucarado fermentado aeróbicamente por un conjunto de bacterias y levaduras que se encuentran inmersas en un biofilm conocido con el nombre de SCOBY (Symbiotic colony of bacteria and yeasts). En la composición química de la bebida se destacan los ácidos acético, glucónico y glucurónico, y el etanol; mientras que el biofilm tiene elevados contenidos de agua e hidratos de carbono, junto a proteínas y minerales en porcentajes mínimos. La celulosa es la biomolécula más importante en la matriz del biofilm. El género bacteriano conocido como mayor productor de dicho polisacárido es el actualmente denominado Komagataeibacter sp. y la especie hallada con más frecuencia es K. xylinus. Existen variables físicoquímicas como el tipo de sustrato, el pH, la temperatura, la concentración de inóculo inicial, la relación superficie/volumen del recipiente donde se desarrolla el cultivo y la aireación del mismo, que inciden en la estabilidad y actividad de los microorganismos y en consecuencia en las cantidades de celulosa producidas durante la fermentación. Los objetivos del trabajo fueron relevar información bibliográfica sobre la generación de celulosa bacteriana durante la producción de kombucha; caracterizar el sistema y evaluar la producción del polisacárido en función de la modificación de algunas variables de fermentación; así como aislar microorganismos productores de celulosa. Para concretar los objetivos experimentales se efectuó la fermentación a partir de biofilms preexistentes, en medios de cultivo con y sin aireación forzada, denominados respectivamente cultivos en agitación o estáticos. Durante dicho proceso, se evaluaron el pH, el índice de refracción, el contenido de ácidos orgánicos y el de etanol en el medio fermentado; mientras que en los biofilms se evaluó el incremento de peso y la composición química final. Paralelamente, se efectuó el aislamiento de cepas bacterianas a partir del biofilmy del líquido, se realizaron pruebas para su caracterización (evaluación de crecimiento en medio sólido, morfología de colonia, coloración de Gram, actividad oxidasa y catalasa) y, finalmente, las cepas seleccionadas fueron secuenciadas para su contrastación con bancos de datos y su potencial asignación de género y especie. En las condiciones ensayadas, la fermentación generó medios con un pH en un rango entre 3 y 4. Se observó la producción de celulosa en ambos modos de cultivo, sin embargo, los biofilms obtenidos a partir de cultivos estáticos presentaron un menor contenido de hidratos de carbono (28 %) que los provenientes de cultivos en agitación (32 %). Se pudieron aislar microorganismos productores de celulosa y se pudo identificar uno de ellos como Komagataeibacter intermedius.

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