Bioquímica
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Examinando Bioquímica por Autor "Assandri, Matías H."
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- ÍtemCloruro de sodio como agente de extracción de proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri (SLP-Lk) : Puesta a punto del proceso y evaluación de propiedades funcionales de las SLP-Lk obtenida(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) González, Juan Ignacios que se encuentra Lentilactobacillus kefiri. Las SLP de distintas cepas de L. kefirihan demostrado poseer interesantes propiedades, tales como la capacidad de activar células presentadoras de antígenos, antagonizar patógenos y servir comoplantilla para la síntesis de bionanocatalizadores metálicos. En este sentido, y teniendo como uno de los objetivos a largo plazo la administración de SLP de L. kefiri en humanos, es necesario considerar la posibilidad de adaptar los métodos de obtención de manera que sean adecuados para la realización de ensayos clínicos. Por lo tanto, en este Trabajo Final proponemos avanzar en la optimización de la extracción con NaCl 5M de las SLP de dos de las cepas de mayor interés en el grupo de trabajo (CIDCA 8348 y CIDCA 83111), y evaluar algunas propiedades funcionales de los extractos así obtenidos. Al utilizar NaCl 5M como agente de extracción, el tiempo de exposición de la suspensión bacteriana no parece estar directamente relacionado con el rendimiento obtenido. Por otro lado, los resultados del análisis cualitativo de los extractos por SDS-PAGE, mostraron que tiempos de exposición más reducidos a la solución de NaCl 5M permiten obtener extractos de SLP con mayor pureza. Finalmente, la forma de agitación no parece tener una incidencia importante sobre el rendimiento y la calidad de los extractos obtenidos. Tomando en cuenta estas observaciones, podemos concluir en que la condición de extracción de SLP-8348 y 83111 de NaCl 5M a un tiempo de 5 minutos parece ser adecuada para ser utilizada en investigaciones futuras. Los estudios funcionales basados en la respuesta generada por los extractos sobre células RAW 264.7 en cultivo, mostraron que los estímulos inducidos por los extractos de NaCl 5M son muy diferentes a los generados por los obtenidos con LiCl 5M, por lo que las interacciones involucradas en dicha respuesta no parecen ser coincidentes. Los resultados obtenidos de los ensayos de citometría de flujo indican que la muerte celular inducida por SLP-8348 o SLP-83111 en combinación con LPS juega un rol muy importante en la interpretación de la respuesta celular generada.
- ÍtemExtracción de proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiricon NaCl 5M : optimización de las condiciones y caracterización de los extractos obtenidos(Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2022) Capostagno, Carla Carolina Leonor
- ÍtemObtención y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-proteínas de capa-s de Lentilactobacillus Kefiri(Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Vera, Estela MarisLa presencia de capa-S es una estructura proteica bidimensional auto-ensamblada que recubre completamente la superficie de los microorganismos que la poseen. En las bacterias patógenas, las proteínas de capa-S (SLP) podrían contribuir a los factores de virulencia a través de los mecanismos de adhesión, coagregación, protección contra la lisis por el sistema del complemento, etc… En Lentilactobacillus kefir se ha descripto la expresión de una única SLP en cada cepa de L. Kefir, con un PM relativo de 66 a 71KDa. L. kefir pertenece al género de los Lactobacillus, estas bacterias acido-lácticas se encuentran con frecuencia en diferentes ecosistemas naturales como plantas, alimentos, ensilajes, aguas residuales y el tracto gastrointestinal y genital de humanos y animales. La presencia de la capa-S se convierte en una característica adaptativa relevante para hacer frente a las condiciones adversas de esos ambientes. Además, como la capa-S constituye la estructura superficial más externa de estas células bacterianas, podría mediar la interacción de los microorganismos con diferentes células eucariotas, así como con la matriz extracelular y los componentes del mucus, hecho que se ha estudiado particularmente para las cepas de lactobacilos caracterizadas como probióticos. Por lo tanto, en el marco de este Trabajo Final, nos propusimos obtener hibridomas productores de Anticuerpos Monoclonales (AcMo) específicos contra proteína de capa-S de L. Kefir y evaluar la reactividad de los AcMo obtenidos frente a proteínas de capa-S de bacterias enteras de distintas cepas de L. Kefir. Se realizaron tres inmunizaciones a ratones BALB/c, por ruta intraperitoneal, con la SLP de L. Kefir cepa CIDCA 83111 (SLP-83111) como antígeno, y se evaluaron dos formulaciones adyuvantes: adyuvante de Freund completo y adyuvante de Freund incompleto. Se observó respuesta de anticuerpos IgG específicos en los 3 animales, los títulos alcanzados (determinados mediante ELISA indirecto) en los ratones inoculados aumentaron a medida que se avanzaba en el plan de inmunización. Además se realizó una fusión para la obtención de AcMo y los hibridomas resultantes fueron caracterizados por el método de Elisa indirecto, Dot-Blot e Inmunoblotting. Aquellos AcMo que presentaron reactividad frente a SLP-83111 se les realizó la clonación por dilución límite. Los hibridomas obtenidos fueron capaces de reconocer al antígeno sobre la bacteria entera en el ensayo de Dot-Blot, además de mostrar reactividad cruzada con otras cepas de L. Kefir (CIDCA 8335, CIDCA8343, CIDCA8348, CIDCA8311 y JCM 5818). Estos resultados sugieren que los AcMo obtenidos con capacidad de reconocer diferentes epítopes, podrían utilizarse como herramientas de ensayo para la detección inmunoquímica, cuantificación y caracterización de bacterias o proteínas de capa-S de las distintas cepas utilizadas en el presente trabajo.