Evaluación de distintos antígenos como candidatos en el desarrollo de métodos de diagnóstico para la detección de anticuerpos de histoplasmina

Abstract

La histoplasmosis (HP) es una micosis sistémica causada por el hongo dimorfo Histoplasma capsulatum. Este microorganismo presenta una fase saprofítica filamentosa que habita naturalmente en ambientes enriquecidos con guano de murciélagos, gallinas, palomas y otras aves. La infección primaria o primoinfección puede ser asintomática o manifestarse como un cuadro respiratorio agudo o subagudo. Sin embargo, en pacientes inmunocomprometidos, la enfermedad puede progresar a formas diseminadas graves, afectando el pulmón y otros órganos, lo que conlleva altas tasas de mortalidad si no se administra un tratamiento oportuno. El diagnóstico definitivo de histoplasmosis (HP), se logra mediante el diagnóstico directo realizado por observación micro y/o macroscópica de levaduras intracelulares, requiriéndose un observador experimentado. Y el Histoplasma por el aislamiento e identificación desde cultivos, lo que requiere entre 7 y 60 días y poseer una CSB (cabina de seguridad biológica) clase 2. Ante la dificultad del diagnóstico definitivo, la evidencia serológica de esta infección fúngica es importante. Se han utilizado una variedad de inmunoensayos para detectar anticuerpos específicos contra H. capsulatum. Según la forma clínica la técnica más aplicada para la detección de anticuerpos es la inmunodifusión con una sensibilidad del 70 al 100 % y una especificidad del 100 %. La prueba de fijación del complemento (FC), una metodología ampliamente utilizada en el pasado, es menos específica (60 a 90%). La detección de antígenos fúngicos mediante inmunoensayos es valiosa en personas inmunocomprometidas, donde tales ensayos logran valores predictivos positivos de 96 a 98%. Existe un test comercial de aglutinación con látex acoplado a histoplasmina, con valores de sensibilidad variables y algunas reacciones cruzadas con otras micosis. Este test comercial no está disponible en Argentina por lo que no fue evaluado en nuestra población. Por ello proponemos desarrollar un reactivo similar realizado con antígenos optimizados para evaluar su utilidad en el inmunodiagnóstico de HP. Los test para detección de anticuerpos utilizan la histoplasmina que se obtiene del sobrenadante de cultivo micelial y los componentes inmunodominantes son los antígenos glicoproteicos H y M. Los anticuerpos anti-M son los primeros en aparecer y persisten durante toda la enfermedad. En el presente trabajo, se estudian distintos antígenos de Histoplasma capsulatum como antígenos útiles para la detección de anticuerpos. Se evaluará la utilización de histoplasmina, galactomanano y la proteína M recombinantes como antígenos en diferentes técnicas, como aglutinación de partículas de látex y dot blot. Se evaluará la inmunoreactividad de distintos antígenos con antisuero de conejo, que están inmunizados con antígenos de Histoplasma capsulatum y de otras micosis (Coccidioides posadasii, Paracoccidioides sp, Aspergillus sp y Cryptococcus neoformans-gatti).