Examinando por Autor "Serradell, María de los Ángeles"

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    Bioquímica clínica de pacientes COVID-19 diabéticos y no diabéticos hospitalizados en el Hospital Modular de Florencio Varela
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2020) Arburúa, Antonella Noemí
    El 31 de diciembre de 2019, la Comisión Municipal de Salud y Sanidad de Wuhan (provincia de Hubei, China) informó sobre un grupo de 27 casos de neumonía de etiología desconocida. El 7 de enero de 2020, identificaron al agente causante de la hoy conocida como COVID-19, llamado coronavirus tipo 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2). El martes 3 de marzo del mismo año en Argentina se notifica el primer caso. Debido a lo nuevo del virus y a lo variado que se reportaba desde cada país, nos hemos encontrado ante una situación donde era desconocido desde los síntomas que presentaban los pacientes, hasta el laboratorio característico que presentaban. En el presente trabajo se estudió la población varelense hospitalizada en el hospital intermedio UPA 11, en los meses de agosto y septiembre, tiempo en que se ubicó la subida y el pico de casos en el municipio. El grupo en estudio estaba compuesto por pacientes que no declaraban y/o tenían ninguna patología de base, y quienes sí, entre las que predominaron, la diabetes y la hipertensión. Como fin se buscaron indicadores bioquímicos relevantes en pacientes diabéticos con COVID-19, y analizar e identificar potenciales parámetros asociados a mal pronóstico en pacientes con COVID-19. Si bien existen reportes que asocian la diabetes con un mayor riesgo de mortalidad ante la infección con COVID-19 (11), esto no se vio en los datos recabados, no hubo diferencia significativa en la frecuencia de diabetes entre los que fallecieron y los que fueron dados de alta. Los pacientes diabéticos presentaron como singular anemia, tanto en mujeres como en hombres, glucemias por encima de 120 g/dL y con episodios constantes de hipoglucemias e hiperglucemias en el transcurso de la internación de un mismo paciente. Los fallecidos con esta morbilidad presentaron plaquetopenia y en los masculinos, adicionalmente, enfermedad renal. Como potenciales parámetros asociados al mal pronóstico y para predecir una progresión desfavorable de la infección viral, fue útil la PCR, la LDH y la albúmina, siendo este último el mejor indicador de laboratorio de rutina.
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    Cloruro de sodio como agente de extracción de proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri (SLP-Lk) : Puesta a punto del proceso y evaluación de propiedades funcionales de las SLP-Lk obtenida
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) González, Juan Ignacio
    s que se encuentra Lentilactobacillus kefiri. Las SLP de distintas cepas de L. kefirihan demostrado poseer interesantes propiedades, tales como la capacidad de activar células presentadoras de antígenos, antagonizar patógenos y servir comoplantilla para la síntesis de bionanocatalizadores metálicos. En este sentido, y teniendo como uno de los objetivos a largo plazo la administración de SLP de L. kefiri en humanos, es necesario considerar la posibilidad de adaptar los métodos de obtención de manera que sean adecuados para la realización de ensayos clínicos. Por lo tanto, en este Trabajo Final proponemos avanzar en la optimización de la extracción con NaCl 5M de las SLP de dos de las cepas de mayor interés en el grupo de trabajo (CIDCA 8348 y CIDCA 83111), y evaluar algunas propiedades funcionales de los extractos así obtenidos. Al utilizar NaCl 5M como agente de extracción, el tiempo de exposición de la suspensión bacteriana no parece estar directamente relacionado con el rendimiento obtenido. Por otro lado, los resultados del análisis cualitativo de los extractos por SDS-PAGE, mostraron que tiempos de exposición más reducidos a la solución de NaCl 5M permiten obtener extractos de SLP con mayor pureza. Finalmente, la forma de agitación no parece tener una incidencia importante sobre el rendimiento y la calidad de los extractos obtenidos. Tomando en cuenta estas observaciones, podemos concluir en que la condición de extracción de SLP-8348 y 83111 de NaCl 5M a un tiempo de 5 minutos parece ser adecuada para ser utilizada en investigaciones futuras. Los estudios funcionales basados en la respuesta generada por los extractos sobre células RAW 264.7 en cultivo, mostraron que los estímulos inducidos por los extractos de NaCl 5M son muy diferentes a los generados por los obtenidos con LiCl 5M, por lo que las interacciones involucradas en dicha respuesta no parecen ser coincidentes. Los resultados obtenidos de los ensayos de citometría de flujo indican que la muerte celular inducida por SLP-8348 o SLP-83111 en combinación con LPS juega un rol muy importante en la interpretación de la respuesta celular generada.
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    Estudios estructurales y funcionales de proteínas superficiales (capa S) de lactobacilos para su aplicación al desarrollo de nuevos adyuvantes vacunales
    (2023-11-21) Bolla, Patricia Araceli; Malamud, Mariano; Ruggera, José Fernando; Serradell, María de los Ángeles
    La capa S es una envoltura (glico)-proteica bidimensional auto-ensamblada presente en numerosas bacterias a la que se han atribuido diversas funciones. Las subunidades aisladas de proteína (SLP) se auto-ensamblan formando arreglos regulares a escala nanométrica, y en estudios in vitro realizados previamente, demostramos que la SLP de Lactobacillus kefiri CIDCA 8348 (SLP- 8348) potencia la respuesta de macrófagos murinos al LPS de manera Ca+2-dependiente, sugiriendo la participación de los glicanos y su reconocimiento por receptores de lectina tipo-C (CLR). Por ello, decidimos estudiar la inmunogenicidad de las SLP de L. kefiri y su capacidad potenciar la inmunidad adaptativa específica frente a otros antígenos (efecto adyuvante), a la vez que buscamos conocer aspectos de la estructura que pudieran influir en su auto-ensamblado en solución. Durante el desarrollo del proyecto demostramos que las SLP provenientes de tres cepas de L. kefiri son capaces de activar células presentadoras de antígeno y potenciar la activación inducida por LPS a través del reconocimiento vía CLR, lo que redunda en una mayor capacidad para estimular LTCD4+ antígeno-específicos. Las SLP-8321 y SLP-8348 ejercen su efecto vía Mincle, mientras que la SLP-5818 lo hace a través de SignR3. Asimismo, estudios in vivo permitieron demostrar la importancia de la integridad de los glicanos en la inmunogenicidad y en la adyuvanticidad de la SLP- 8348. Mediante TEM demostramos que la SLP-8348 adopta una geometría hexagonal al auto- ensamblarse en solución. Por lo tanto, las SLP de L. kefiri emergen como herramientas valiosas para el desarrollo nuevos adyuvantes vacunales provenientes de bacterias seguras.
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    Obtención de anticuerpos policlonales específicos para proteínas de capa-S de Clostridium difficile
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2020) Verón, Daiana Micaela
    En el presente trabajo se propuso obtener herramientas inmunoquímicas específicas que nos permitan detectar las SLP de C. difficile. Se realizaron tres inmunizaciones a ratones BALB/c, por ruta intraperitoneal, con la SLP de C. difficile cepa VPI 10463 (SLP-10463) como antígeno, y se evaluaron dos formulaciones adyuvantes: adyuvante de Freund incompleto (IFA) y la SLP de L. kefiri CIDCA 8348 (SLP-8348). Si bien se observó respuesta de anticuerpos IgG específicos en ambos grupos de animales, los títulos alcanzados (determinados mediante ELISA indirecto) en los ratones inoculados con IFA, fueron mayores. Por otro lado, los anticuerpos obtenidos por inmunización con SLP-VPI 10463 son capaces de reconocer al antígeno sobre la bacteria entera en un ensayo de Dot-Blot, además de mostrar reactividad cruzada con otras cepas de aislados clínicos de C. difficile. Estos resultados sugieren que los antisueros obtenidos tendrían aplicación en diferentes ensayos para la detección o bloqueo de las SLP o de las bacterias enteras.
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    Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-proteínas de capa-s de Lentilactobacillus Kefiri
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche. Instituto de Ciencias de la Salud, 2023-12-07) Vera, Estela Maris
    La presencia de capa-S es una estructura proteica bidimensional auto-ensamblada que recubre completamente la superficie de los microorganismos que la poseen. En las bacterias patógenas, las proteínas de capa-S (SLP) podrían contribuir a los factores de virulencia a través de los mecanismos de adhesión, coagregación, protección contra la lisis por el sistema del complemento, etc… En Lentilactobacillus kefir se ha descripto la expresión de una única SLP en cada cepa de L. Kefir, con un PM relativo de 66 a 71KDa. L. kefir pertenece al género de los Lactobacillus, estas bacterias acido-lácticas se encuentran con frecuencia en diferentes ecosistemas naturales como plantas, alimentos, ensilajes, aguas residuales y el tracto gastrointestinal y genital de humanos y animales. La presencia de la capa-S se convierte en una característica adaptativa relevante para hacer frente a las condiciones adversas de esos ambientes. Además, como la capa-S constituye la estructura superficial más externa de estas células bacterianas, podría mediar la interacción de los microorganismos con diferentes células eucariotas, así como con la matriz extracelular y los componentes del mucus, hecho que se ha estudiado particularmente para las cepas de lactobacilos caracterizadas como probióticos. Por lo tanto, en el marco de este Trabajo Final, nos propusimos obtener hibridomas productores de Anticuerpos Monoclonales (AcMo) específicos contra proteína de capa-S de L. Kefir y evaluar la reactividad de los AcMo obtenidos frente a proteínas de capa-S de bacterias enteras de distintas cepas de L. Kefir. Se realizaron tres inmunizaciones a ratones BALB/c, por ruta intraperitoneal, con la SLP de L. Kefir cepa CIDCA 83111 (SLP-83111) como antígeno, y se evaluaron dos formulaciones adyuvantes: adyuvante de Freund completo y adyuvante de Freund incompleto. Se observó respuesta de anticuerpos IgG específicos en los 3 animales, los títulos alcanzados (determinados mediante ELISA indirecto) en los ratones inoculados aumentaron a medida que se avanzaba en el plan de inmunización. Además se realizó una fusión para la obtención de AcMo y los hibridomas resultantes fueron caracterizados por el método de Elisa indirecto, Dot-Blot e Inmunoblotting. Aquellos AcMo que presentaron reactividad frente a SLP-83111 se les realizó la clonación por dilución límite. Los hibridomas obtenidos fueron capaces de reconocer al antígeno sobre la bacteria entera en el ensayo de Dot-Blot, además de mostrar reactividad cruzada con otras cepas de L. Kefir (CIDCA 8335, CIDCA8343, CIDCA8348, CIDCA8311 y JCM 5818). Estos resultados sugieren que los AcMo obtenidos con capacidad de reconocer diferentes epítopes, podrían utilizarse como herramientas de ensayo para la detección inmunoquímica, cuantificación y caracterización de bacterias o proteínas de capa-S de las distintas cepas utilizadas en el presente trabajo.
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    Programa de Farmacovigilancia Intensiva de Clozapina : Seguimiento del paciente Fase I, detección precoz de riesgos y análisis de alteraciones leucocitarias en pacientes ambulatorios del Hospital Interzonal Dr. José A. Esteves de Lomas de Zamora
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2022) Radics, Sabrina Aldana
    El uso de la Clozapina como antipsicótico tiene como principal reacción adversa la posibilidad de causar leucopenia que puede llevar a agranulocitosis, y si no se detecta a tiempo provocar serios problemas de salud e incluso la muerte. Por esta razón se crea el Programa de Farmacovigilancia Intensiva de Clozapina con el fin de evitar las complicaciones que puede traer el uso de este fármaco. En este trabajo integrador final se analiza y evalúa el seguimiento del Programa antes mencionado en pacientes ambulatorios de Fase I que concurren al Hospital Interzonal Dr. José A. Esteves durante el año 2021; como así también la aparición de leucopenias y el cumplimiento de las 18 semanas de controles hematológicos semanales.