Examinando por Autor "Bolla, Patricia Araceli"

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    Estudios estructurales y funcionales de proteínas superficiales (capa S) de lactobacilos para su aplicación al desarrollo de nuevos adyuvantes vacunales
    (2023-11-21) Bolla, Patricia Araceli; Malamud, Mariano; Ruggera, José Fernando; Serradell, María de los Ángeles
    La capa S es una envoltura (glico)-proteica bidimensional auto-ensamblada presente en numerosas bacterias a la que se han atribuido diversas funciones. Las subunidades aisladas de proteína (SLP) se auto-ensamblan formando arreglos regulares a escala nanométrica, y en estudios in vitro realizados previamente, demostramos que la SLP de Lactobacillus kefiri CIDCA 8348 (SLP- 8348) potencia la respuesta de macrófagos murinos al LPS de manera Ca+2-dependiente, sugiriendo la participación de los glicanos y su reconocimiento por receptores de lectina tipo-C (CLR). Por ello, decidimos estudiar la inmunogenicidad de las SLP de L. kefiri y su capacidad potenciar la inmunidad adaptativa específica frente a otros antígenos (efecto adyuvante), a la vez que buscamos conocer aspectos de la estructura que pudieran influir en su auto-ensamblado en solución. Durante el desarrollo del proyecto demostramos que las SLP provenientes de tres cepas de L. kefiri son capaces de activar células presentadoras de antígeno y potenciar la activación inducida por LPS a través del reconocimiento vía CLR, lo que redunda en una mayor capacidad para estimular LTCD4+ antígeno-específicos. Las SLP-8321 y SLP-8348 ejercen su efecto vía Mincle, mientras que la SLP-5818 lo hace a través de SignR3. Asimismo, estudios in vivo permitieron demostrar la importancia de la integridad de los glicanos en la inmunogenicidad y en la adyuvanticidad de la SLP- 8348. Mediante TEM demostramos que la SLP-8348 adopta una geometría hexagonal al auto- ensamblarse en solución. Por lo tanto, las SLP de L. kefiri emergen como herramientas valiosas para el desarrollo nuevos adyuvantes vacunales provenientes de bacterias seguras.
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    Prevalencia de Klebsiella pneumoniae productora de KPC en pacientes colonizados con especies productoras de carbapenemasas internados en la Unidad de Terapia Intensiva del Sanatorio de la Trinidad de Quilmes
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2021) Carballo, Yanina Eugenia
    La emergencia de organismos multirresistenteses un tema de preocupación mundial que motivó una alerta declarada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) en el año 2017 para patógenos multirresistentes. Dentro de estos patógenos encontramos a las enterobacterias, cuyo hábitat natural es el tracto intestinal de seres humanos y animales y el medio ambiente. Las especies prevalentes de esta familia son Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae, las cuales son causantes brotes nosocomiales produciendo infecciones del tracto urinario, bacteriemias y neumonías en pacientes internados. Cuentan con una alta tasa de diseminación mundial y muchas de ellas son capaces de recibir material genético foráneo, favoreciendo la transmisión vertical de genes de resistencia. Durante la pandemia declarada en marzo del 2020 en nuestro país, las internaciones aumentaron exponencialmente y con ellas, las infecciones asociadas al cuidado de la salud (IACS), acelerando el proceso de evolución de multirresistencia de estos microorganismos. En este período el laboratorio de bacteriología fue una herramienta fundamental en el diagnostico, tratamiento y control de infecciones. El objetivo de este trabajo fue realizar un análisis poblacional de las especies colonizantes en el área de cuidados críticos del Sanatorio de la Trinidad de Quilmes, en pacientes internados por COVID-19 y su evolución en el contexto de pandemia. El análisis estadístico se realizó en torno a la prevalencia de K. pneumoniae productora de KPC, especie diseminada en el país desde el año 2006 que desde entonces produce una alta tasa de infecciones nosocomiales. Se analizaron 682 hisopados rectales para la búsqueda de microorganismos productores de carbapenemasas mediante el cultivo de los mismos en medios selectivos para KPC, donde 241 fueron positivos. Aquellos hisopados positivos se resembraron para la detección del mecanismo de resistencia mediante sinergia por discos. Se diferenciaron entre microorganismos productores de enzimas tipo metalobetalactamasas (MBL), tipo KPC, y aquellos resistentes para carbapenemasas que no eran positivos para estos mecanismos de resistencia, fueron informados como multirresistentes (MR). Se observó un aumento de la prevalencia de K. pneumoniae productora de KPC entre los pacientes colonizados en el período correspondiente a la primera ola de COVID 19 en el país, pasando del 40% al 74,5% con una disminución paulatina hacia el final de la segunda ola, donde se registró una prevalencia del 13,5%. Simultáneamente se registró la emergencia de K. pneumoniae productora de MBL que solo fue detectada luego de la primera ola y hacia el final del período correspondiente a la segunda ola, registró una prevalencia de 14,4% de la misma. En simultáneo se detectó la modificación de las especies colonizantes hacia el final de la segunda ola con un fuerte predominio de Acinetobater baumannii multirresistente y la detección de K. pneumoniae doble productora de carbapenemasas del tipo KPC+MBL.
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    Proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri como template y estabilizante para la obtención de nanopartículas de oro : Aplicación en detección colorimétrica de arsénico en agua
    (Universidad Nacional Arturo Jauretche, 2023) Laserna, Daniela Alejandra
    El aumento de la demanda de agua potable ha llevado a un creciente interés en la calidad del agua subterránea. En este contexto, la contaminación por arsénico ha surgido como una preocupación significativa debido a su toxicidad para los humanos. Argentina, junto con Chile y México, se encuentra entre los países más afectados por la contaminación de arsénico en el agua. A pesar de los esfuerzos normativos, los límites permitidos de concentración de arsénico no se han cumplido completamente. La exposición continua a niveles altos de arsénico puede provocar problemas de salud graves, como el HACRE que puede derivar a cáncer de piel, afectaciones en órganos vitales y, en casos extremos, la muerte. Este estudio aborda la necesidad de desarrollar un sistema-biosensor para la detección de arsénico, utilizando proteínas de capa-S de Lentilactobacillus kefiri. Estas proteínas, conocidas por su capacidad de autoensamblaje, se han utilizado en la síntesis y estabilización de nanopartículas de oro. Las propiedades ópticas de estas nanopartículas, fenómeno de resonancia de plasmon superficial localizado, permiten la detección colorimétrica de arsénico, ofreciendo una alternativa efectiva para monitorear la contaminación en el agua. El trabajo aborda el proceso de cultivo y caracterización de las SLP. Luego, la obtención de nanobiosistemas utilizando nanopartículas de oro (AuNPs) estabilizadas y soportadas con proteínas de capa-S para la detección de arsénico. Se utilizaron tres métodos de reducción: H2, H2 seguido de NaBH4 y ácido cítrico para la obtención de nanopartículas de oro coloidales. Se realizaron pruebas de estabilidad frente a fuerzas iónicas mediante un test de sal. Se seleccionó un sistema específico que cumplió con criterios de estabilidad visual y espectroscópica. Este sistema seleccionado se propone como un potencial biosensor para la detección de arsénico. El estudio para la detección de arsénico (V) en medio acuoso a través del monitoreo el corrimiento del máximo de longitud de onda por la agregación de las nanopartículas en presencia del arsénico. En general, el nanobiosensor desarrollado, mostró una sensibilidad significativa para la detección de arsénico, sentando las bases para posibles aplicaciones futuras en la detección cuantitativa de este contaminante en aguas. Se evaluó la interferencia en la respuesta del biosensor frente a diferentes metales, con un enfoque particular en metales comunes en aguas de red. Se utilizaron concentraciones de metales no representativas de las aguas de red. Se realizaron análisis mediante espectroscopía UV-vis y observación visual. La respuesta del biosensor no fue idéntica para todos los analitos, a pesar de interacciones metal-ligando convencionales. Se concluye que algunos metales pueden interferir en la detección de arsénico, pero a concentraciones elevadas que no reflejan la realidad en aguas de red. Además, la naturaleza específica de las interacciones entre los metales y las proteínas de capas-S podría ser un área de interés para investigaciones futuras. Este estudio presenta un enfoque completo y detallado sobre la síntesis de nanopartículas de oro y su aplicación en la detección de arsénico. La identificación de interferentes y la consideración de condiciones realistas en el agua potable son aspectos valiosos. Las limitaciones identificadas ofrecen oportunidades para mejoras futuras en la sensibilidad y especificidad del biosensor.